氧化苦参碱对大鼠心肌纤维化的保护作用及对gf--smad信号通路的影响.docxVIP

氧化苦参碱对大鼠心肌纤维化的保护作用及对gf--smad信号通路的影响 急性心力衰竭（ami）后的病史发展导致的心肌重建可能会导致室心扩大、功能障碍和猝死。目前,预防和逆转心肌重塑已成为防治心血管系统疾病的焦点之一。因此,寻找合理有效的防治与逆转心肌重塑的药物成为世界各国医药研究工作的重大课题。我国独特的中医药理论指导下的防病治病体系是前人对疾病防治的系统总结和精心归纳的结果,从传统中药中寻找防治心肌重塑的药物对促进中医药现代化和产业化以及中医药在世界范围内被广泛认可具有重要的社会意义和经济价值。 中药苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根,具有清热燥湿,杀虫,利尿等作用。氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)是豆科植物苦参的主要有效成分,具有广泛的药理作用,本实验室前期研究结果证实,OMT对大鼠冠脉结扎诱发实验性心肌纤维化具有显著的保护作用。本研究采用结扎冠状动脉法复制AMI诱发大鼠实验性心肌纤维化模型,进一步探索OMT防治心肌纤维化的可能作用机制。 1 材料表面 1.1 实验动物及仪器 雄性SD大鼠,清洁级,9周龄,60只,体重(275±25)g,由贵阳医学院实验动物中心提供,合格证号SCXK(黔)2000-0001。 1.2 药物及试剂 氧化苦参碱(南京泽郎医药科技有限公司,批;卡托普利片(山东华信制药有限公司,批号;Trizol Reagent(invitrogen,Cat 15596-026);RT kit(Ta Ka Ra Prime ScriptTMRT Reagent Kit,code DRR037S,Lot BK1301);PCR kit[Ta Ka Ra TaqTM,宝生物工程(大连)有限公司]。 1.3 -20,2.5和tc-126基因检测 HX-300动物呼吸机(成都泰盟科技有限公司);BS223S电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);移液器(1 m L,200,20,2.5μL:Eppendorf AG,North America Inc.,USA);Gene quant pro 80-2114-98紫外分光光度计(Amersham Biosciences);TC-512基因扩增仪(Techne);Mini Run GE-100电泳仪(杭州博日科技有限公司);Image quant400凝胶成像仪(GE Healthcare)。 2 方法 2.1 动物心肌组织病理学观察 大鼠称重后用3%水合氯醛腹腔注射麻醉(10 mL·kg-1),固定于鼠板,用针形电极插入四肢皮下,观察记录标准肢体Ⅱ导联心电图。胸部去毛,消毒,在第4,5肋间距胸骨左缘2 mm处剪开皮肤,上下纵向延伸切口约2 cm,逐层钝性分离皮下组织、肌肉至胸壁,将皮肤作荷包缝合备用。将动物呼吸机调至频率每分钟80次、呼吸时程比2∶1、潮气量16~20 mL·kg-1,面罩式供呼吸。于第4,5肋间距胸骨左缘约2 mm处打开胸壁,剪断第4,5肋(或第3,4肋),挑开胸膜,小拉钩拉开胸壁,暴露心脏。挑开心包膜,轻压右侧胸壁挤出心脏,用无菌7-0号医用缝合线在肺动脉圆锥与左心耳之间距主动脉根部约5 mm处结扎左冠状动脉前降支,结扎深度约1~2 mm。将心脏迅速放回胸腔,轻柔挤压胸腔排尽气体,关闭胸腔。待大鼠恢复自主呼吸后,停止人工呼吸。观察并记录结扎后10 min大鼠标准肢体Ⅱ导联心电图,比较结扎前后肢体Ⅱ导联心电图,以J点的变化标志结扎手术复制AMI成功。假手术组大鼠冠脉穿线但未行结扎手术。各组大鼠均术后予青霉素预防感染,每只14万U,腹腔注射,每天1次,连续3 d。 2.2 大鼠领之间穿线时不表达固结实验 将造模复制成功的大鼠随机分为模型组(M)、OMT高剂量组(OMT-H,50 mg·kg-1)、OMT中剂量组(OMT-M,25 mg·kg-1)、OMT低剂量组(OMT-L,12.5 mg·kg-1)、卡托普利组(Cap,50 mg·kg-1);另设假手术组(Sham),假手术组大鼠只做冠状动脉穿线而不结扎。各组于模型复制后12 h开始灌胃给药,给药容积为10 mL·kg-1,每日1次,其中假手术组、模型组的大鼠每日给予相同容积的蒸馏水灌胃,连续给药8周。每组保证实验结束时有8只动物存活。各组于模型复制后8周检测指标并取标本,其中4只用于病理学分析,另外4只用于PCR扩增。 2.3 细胞浆及他组织的he染色切片观察 HE染色分析:方法参照文献,每个标本取心脏横切面石蜡切片用于HE染色。石蜡切片乙醇梯度脱水后,经历苏木素染色,0.5%盐酸乙醇分化,伊红复染,中性树胶固定后观察,细胞核呈蓝色,细胞浆及其他组织呈粉红色,然后利用图像分析系统低倍镜下观察每张切片,并对HE染