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心肌缺血再灌注模型的研究进展 心肌缺血、心脏病和其他心血管疾病的治疗变得越来越重要。现在，最常用的治疗方法是改善缺氧区域的血液供应。1960年,Jennings等首次提出了心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)的概念,指出缺血心肌组织血流恢复后反而出现了组织细胞损伤加重的病理状态,引起心肌功能障碍及心律失常的发生。较急性心肌梗死而言,心肌缺血再灌注所引起心肌损伤的程度更为严重。Yellon等研究表明,MIRI所引起心肌梗死面积是急性心肌梗死面积的2倍左右,酶学指标也远偏离正常值。 随着近几十年的发展,MIRI模型的研究已经成为临床前药物评价的重点。新药研发及对药物的评价都是基于相关的实验动物模型来完成。Kim等对大鼠MIRI模型研究发现,大黄酮素通过抑制核因子(NF)-κB活性来减轻心肌损伤;Li等通过家兔MIRI模型来评价胰岛素对MIRI的疗效。MIRI动物模型建立的成功与否,对评价药物治疗效果至关重要。但是,在以往的研究过程中,往往存在MIRI动物模型建立成功率低、死亡率高的问题。本文在综合国内外相关文献基础上,对影响MIRI动物模型建立的主要因素作一简要综述。 1 血管内皮改变 MIRI模型建立的主要方法是通过结扎相关血管引起左心室缺血或梗死,一般常选择结扎冠状动脉的分支,可成功复制出左心室前壁心肌梗死,并观察到急性心肌梗死的一系列典型变化。 建立MIRI所结扎的冠状动脉血管主要有冠状动脉左前降支、左旋支,可根据动物种类和药物作用特点选用结扎血管的类型。一般而言,冠状动脉左前降支闭塞主要引起左心室前壁、心尖部、下侧壁、前间隔和二尖瓣前乳头肌梗死;冠状动脉左回旋支闭塞主要引起高侧壁、膈面(左冠状动脉占优势时)和左心房梗死,可能累及房室结。大鼠等小动物由于其冠状动脉左前降支延伸至心尖部,左旋支不发达,选择结扎其左前降支建立实验动物模型成功率高;家兔、狗等大中型动物由于其冠状动脉左前降支短小,有些动物甚至不超过1 cm,而其左旋支覆盖面积广,结扎此血管较为适宜。 在评价不同药物治疗效果时,应结合药物作用机制及不同类型血管闭塞所引发的心肌梗死区域,选择适宜的血管进行结扎。例如,硝酸酯类药物主要通过减少左前降支阻塞而降低心肌前壁梗死,减少MIRI并发症亦是其作用机制之一。因此,评价此类药物的治疗效果,应主要结扎左前降支。β受体阻滞剂主要是使非缺血区的血管阻力增高,而缺血区的血管则由于缺氧呈现代偿性扩张状态,促使血液更多的流向缺血区,减慢心率而延长心脏的舒张期,增加冠脉的灌注时间,有利于血液向缺血区流动。钙通道阻滞剂主要是通过降低心肌耗氧量、增加心肌的血液供应和保护缺血的心肌细胞来治疗MIRI。由于这2种药物的作用机制是非特异性的,因此,结扎各种冠脉血管所建立的MIRI模型,均可用于其药效学作用评价。 2 miri模型的建立 确定所结扎血管适宜结扎部位是MIRI模型制作成功的重要环节。结扎部位离冠状动脉起源处越近,所结扎的冠状动脉血管相对较粗,肉眼越容易分辨、结扎相对较易,但有相当高的心律失常和死亡率(30%)。反之,结扎部位离冠状动脉起源处越远,所结扎冠状动脉越细,肉眼难分辨,手术不易操作,梗死范围不一定满足实验要求,但能使动物死亡率降低。 目前,建立大鼠等小动物MIRI模型时,一般以左冠状静脉主干为标志,选择左心耳下缘2 mm处进针,在肺动脉圆锥旁出针来结扎冠状动脉左前降支,操作简便易行,结扎成功率高且动物死亡率低(10%)。而建立大中型动物(如狗、家兔等)的MIRI模型,选择在心脏的左心耳后下缘找冠状动脉左旋支靠近左心耳5~10 mm,约占整个心室1/3处进针为宜。 3 模型建立的进针深度 穿线时的进针深度对MIRI模型的建立成功与否至关重要,进针深容易穿透心室壁,造成大量出血使模型建立失败;而进针太浅则易穿到血管或结扎不到血管,且在结扎时容易引起血管断裂。大鼠模型建立时的进针深度为1.0~1.5 mm、宽度为2.0~3.0 mm时所建立的模型成功率比较高。根据以往实验观察,大中型动物模型建立时的进针深度一般为2.0~3.0 mm、宽度为4.0~5.0 mm较为适宜。 4 市松林的制作操作 MIRI模型建立成功与否与穿线结扎松紧度关系密切,结扎过松或过紧均会影响造模的成功率。为避免上述问题的出现,在建立模型过程中,最好由同一人完成整个手术过程,以保持其手法一致。结扎时,应先在结扎线下放一根1 mm(大鼠)、3 mm(家兔)、5 mm(狗和猪)的乳胶管,结扎松紧度要适宜,结扎过程中要注意观察心肌颜色变化,发现心肌发灰或颜色变深,视为此结扎松紧度适宜。如果太紧可能引发血管断裂,太松造成不完全性缺血有可能会引起侧支循环的建立。许多国内外学者一致认为,冠状动脉完全