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五子衍宗丸对小鼠耐力和免疫功能的影响 五子衍宗丸是中医补肾益精的传统方剂，由枸杞、兔蚕丝籽、覆盆子、五味子和香蕉籽组成。临床上主要用于治疗肾虚腰痛,遗精早泄,阳痿不育等男性性功能疾病,疗效卓著。近年来有文献报道从中医补肾生髓益智的理论出发,将该药用于健忘、轻度认知障碍的干预上疗效明显,并能提高机体免疫功能和抗应激能力等。本文对其进行相关药效学研究。 1 材料表面 1.1 北京部分科学研究进展 五子衍宗丸,1 g·g-1生药干粉,批北京同仁堂股份有限公司科学研究所提供;男宝胶囊,0.3 g/粒,批号1001074,山西康威制药有限责任公司生产;盐酸左旋咪唑片,批号060719,山东省莒南制药厂生产。 1.2 圆形水池、图像自动采集和处理系统 Morris水迷宫实验系统(中国医学科学院药物研究所),由圆形水池、图像自动采集和处理系统组成。紫外分光光度计SHMADZU UV-120-02(日本产);电子天平DENVER INSTRUMENT(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。 1.3 化学试剂及试剂 炭黑墨汁(生物染色),批国药集团化学试剂有限公司生产;2,4-二硝基氟苯(DNFB),批号080702,中国医药(集团)上海化学试剂公司生产;丙酮,批北京世纪红星化工有限责任公司生产;橄榄油,批号国药集团化学试剂有限公司生产;钠石灰,批上海五四化学试剂有限公司生产。 1.4 syxk-ss 选用ICR雄性小鼠,体重18~22 g,动物合格证号SCXK(京)2007-0001;由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。在中国中医科学院西苑医院实验动物中心饲养,二级动物饲养设施,合格证号SYXK(京)2009-0001。室温22~25℃,相对湿度45%~60%。 2 方法 2.1 动物ig小鼠实验 将小鼠随机分为5组,10只/组。即:正常对照组、男宝组(0.5 g·kg-1)、五子衍宗丸高、中、低剂量组(2.4,1.2,0.6 g生药·kg-1)。(五子衍宗丸临床用量按生药计为9.47 g/人,按70 kg/人计算为0.135 g.kg-1,小鼠等效剂量为1.23 g·kg-1)。 所有动物ig给药,正常对照组ig等体积蒸馏水。1次/d,连续2周,训练4 d后进行水迷路实验(训练期间继续ig给药)。第5天药后1 h,进行水迷宫定位航行实验。通过观察和记录小鼠寻找并爬上平台的路线图及所需时间,分析和推断小鼠的学习、记忆和空间认知等方面的能力。 Morris水迷宫图像自动采集和处理系统能自动地采集动物的入水位置、游泳的速度、搜索目标的所需时间、运行轨迹和搜索策略等参数,并可对所采集的各种数据进行统计和分析。 2.2 尾静脉激光血药向血样采集 将实验小鼠随机分为6组,左旋咪唑组(25 mg·kg-1),其他组别同实验2.1。各组按剂量连续ig给药,正常对照组ig等体积蒸馏水。1次/d,连续给药1周。末次给药后1 h,尾静脉注射10%炭黑墨汁(0.2 m L/只)。分别于2 min和10 min,从眼眶静脉取血20μL,加入4 m L蒸馏水中摇匀。用分光光度计在600nm下比色,测吸收度(A),计算廓清指数K值。 2.3 小鼠耳片称质量检测 将实验小鼠随机分为7组,模型组,左旋咪唑组(25mg·kg-1),其他组别同实验2.1。各组按剂量ig给药,1日/次,连续给药3 d后,除正常对照组外,每鼠腹部电推去毛,范围约2 cm×2 cm大小。将新鲜配制的1%DNFB溶液50μL均匀涂抹于小鼠腹部(致敏)。致敏后第5天,将新鲜配制的1%DNFB溶液20μL均匀涂抹于各组小鼠右耳两面(攻击)。在致敏和攻击期间各组继续ig给药,24 h后,颈椎脱臼处死小鼠剪下左右耳壳,用打孔器取下直径8 mm的耳片称质量。左右耳片质量之差为肿胀度(FPR)。 2.4 药,2次/d,连续1周 实验分组、给药剂量同实验2.1。各组按剂量ig给药,1次/d,连续1周。末次药后1 h,将小鼠迅速放入装有钠石灰(10g/瓶)的250 m L广口瓶中,用凡士林密封瓶盖,秒表记录小鼠缺氧死亡时间。 2.5 量ig给药方案 实验分组、给药剂量同实验2.1。各组按剂量ig给药,1次/d,连续1周。末次给药后1 h,将小鼠迅速放入常温水中(水深20㎝),用秒表计算自小鼠落水至溺死所需时间。 2.6 统计处理 所有实验数据均以ue0af±s表示,采用SPSS 11.5 for Windows软件进行方差分析,以P0.05为具有统计学意义。 3 结果 3.1 小鼠寻找并安装上平台所需时间及总路由的情况 实验数据见表1。经过4 d的训练,五子衍宗丸各剂量组及男宝组小鼠寻找并爬上平台所需时间及总路程明显缩