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新月组织培养研究进展 玫瑰是蔷薇科的多年生叶子和多年生灌木。它是中国最早的传统花之一，也是世界上最古老的花之一。它起源于中国，17年前在欧洲传入世界。目前月季的繁殖技术仍沿袭了传统的扦插、嫁接、压条等方法，这些方法限制了月季的繁殖量，不能满足工厂化大生产发展的需要。1980年Hasegawa成功在MS培养基上建立了月季试管苗无性系，开辟了月季组培的先河。利用组培的方法繁殖月季速度快、质量高，同时也利于月季的育种研究。随着月季组培技术的发展，不断有研究者探讨影响月季离体快速繁殖的因素，发现这些影响因素不是单一的，其中主要影响因素有外植体的选择与灭菌、组培各阶段中的培养基和培养条件选择等，本文对这些影响因素的研究作一综述，为月季的工厂化生产提供依据。 1 不同接种方式对再生芽的影响 月季组培外植体通常采用带芽茎段。同一枝条上不同部位的腋芽诱导效果不同。取枝条中部的腋芽效果最好，这可能与月季枝条不同部位的腋芽成熟程度及休眠状态不同等因素有关。很多研究都证明枝条中部的腋芽萌发较顶部和基部时间早，且中部的腋芽长势好，增殖系数高，其次是基部，再次是顶部。但Podwyszynska等的研究表明，外植体以第2节位的腋芽最有利于增殖。几乎所有研究月季组培的工作者都会利用带芽茎段进行培养，但也有少数采用叶片、叶柄、叶盘为外植体。采用顶芽（即茎尖）的效果不如带芽茎段。沈国正等分别以茎段和顶芽为外植体，发现以茎段为继代材料的增殖系数均优于以顶芽为继代材料的增殖系数。可见，带芽茎段是月季组培的最佳外植体。外植体的休眠状态对芽的萌动和灭菌也有影响。李青等采用1年生枝条的冬芽和当年生枝条的腋芽为外植体进行比较，发现越冬芽较嫩枝条的芽成活率高，且萌动所需时间较短，主要原因是芽内积累了丰富的营养物质，在适宜的条件下很快萌发生长；而春季嫩枝上的芽，由于刚刚形成且未经休眠，所以本身较弱，但越冬芽污染率高于嫩枝芽。外植体的接种方式影响再生芽生长量。朱建镛等在研究两种微型月季品种的单节组织培养时发现，将茎段平放、直插或斜插，所长出新枝条的鲜重和干重比将茎段倒插所长出的新枝条重。于冰沁对微型月季的研究表明，垂直接种、斜向上45°接种是最佳的接种方式，水平接种其次，反转接种的腋芽再生芽生长量明显低于前3种接种方式，这可能与枝条原有的生长极性有关。 外植体灭菌方法很多，使用药剂不一，但其目的是要得到无菌、正常的活体材料，因此应根据材料的不同来决定灭菌程序和处理时间。月季外植体灭菌通常采用70%或75%的酒精灭菌一定时间（60 s以内）后，再在0.1%HgCl2中灭菌8～15 min，也有采用次氯酸钠溶液和新洁尔灭菌的。灭菌时间的长短是影响灭菌效果的关键。韩秀慧等研究表明时间对污染率影响最大，消毒液浓度及消毒方式次之。值得注意的是，虽然消毒液浓度过大或处理时间过长的灭菌效果好，但往往容易引起植物中毒，使表面组织破坏、颜色变黑，失去萌芽力。张宇斌等的研究就说明随着HgCl2处理时间的延长，月季的污染率逐渐降低，而成活率也有下降趋势。选择外植体的时间对灭菌的效果也有影响，大体表现为春秋两季较好。春季植物体内的内源激素含量相对高，枝条孕育着极强的生命力，而且带菌量相对较少；秋季的温、湿度和光照都非常适合月季生长，使其枝条、叶片、花色、花型等均能得到充分体现，因植株健壮，其枝条更具有抗药性，且此时高温、高湿季节已过，接种后不易污染，启动较快。除特殊需要外，应尽量避免夏季和冬季启动组培繁殖。特别是雨季，气温高、湿度大，带菌量也大，会增加消毒的难度。张宇斌等的研究表明，在春季HgCl2处理的最适条件是6 min，而在秋季为15 min，春季月季比秋季月季具有更高的成活率和更低的污染率。原因是春季大量细菌、真菌等杂菌正处于生活期，易被HgCl2杀死；秋季各种杂菌多处于休眠期，HgCl2很难将其杀死，待外植体转入培养基后，在合适的温度和湿度下，杂菌恢复活力，进而造成污染。灭菌前采用适当的措施可以降低污染率、提高外植体的萌发，如消毒前对茎节用毛刷刷洗和用合适浓度的青霉素以及多菌灵混合液处理或者采用磁力搅拌均可提高灭菌效果，而Halmagyi等对诱导24 h后的离体芽尖实行冷藏处理也能提高芽的再生率。 2 植物生长调节剂的选择 月季组培的培养基大体分为启动培养基、继代培养基（增殖培养基）、生根培养基，有的还有壮苗培养基。培养基成分均包括糖（碳源）、无机盐（营养源）、激素配比（生长素与细胞分裂素的比例）。影响月季组培的植物生长调节剂主要有细胞分裂素（6-BA、ZT、ZR、2iP、ipA和TDZ等）、生长素（NAA、IAA、IBA等）和赤霉素（GA3)3种。细胞分裂素参与克服顶端优势的过程，因而能促进侧枝的萌发和生长，嫩芽的繁殖主要是细胞分裂素影响的结果。生长素最明显的作用是促进生长，但其促进作用