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三鹿事件：三聚氰胺检测方法汇总三鹿奶粉事件沸沸扬扬，各地致病患儿的致命成一三聚氤胺检测方法汇总 GC-MS法测定动物食品中的三聚氤胺 Spectra-Quad实现三聚氤胺含量在线检测 超高效液相色谱—电喷雾串联质谱法测定饲料中残留的三聚氤胺 反相高效液相色谱法测定饲料中三聚氤胺的含量 高效液相色谱-二极管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氤胺 高效液相色谱法(HPLC)测定饲料中三聚氤胺的含量 高效液相色谱-四极杆质谱联用测定饲料中三聚氤胺含量 固相萃取与高效液相色谱联用测定宠物食品中三聚氤胺 液相色谱串联质谱法(LC-MSMS)分析宠物食品中三聚氤胺 液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氤胺残留 GC-MS法测定动物食品中的三聚氤胺 2.1仪器与条件 Agilent1100高效液相色谱仪(美国，Agilent公司)；二极管阵列检测器(DAD)，检测波长240nm，柱温：40°C。 AgelaVenusilTMASBC18(4.6X250mm)；缓冲液：10mM柠檬酸，10mM庚烷磺酸钠；流动相：缓冲溶液：乙腈=85:15；流速：1.0mL/min。 AgelaVenusilTMASBC8(4.6X250mm)；流动相：缓冲液：乙腈=85：15；缓冲液：10mM柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0；流速：1.0mL/min； 离子交换固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX(北京艾杰尔科技有限公司) 2.2试剂与样品 宠物饲料样品(农业部饲料供应中心提供)；甲醇、乙腈为北京艾杰尔科技有限公司提供；氨水、乙酸铅、三氯乙酸、均购于北京化学试剂公司；三聚氤胺标准品、柠檬酸、辛烷磺酸钠(Sigma公司)；甲醇为色谱纯，其他均为化学纯。 3实验方法 3.1样品前处理方法 标准样品配制： 取50mg三聚氤胺标准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液，使用时，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀释全所要的浓度。 提取： 称取饲料样品5甘，加入50ml0.1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入2mL2%乙酸铅溶液，超声20min。 然后取部分溶液转移至10mL离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX)。 净化(PCX小柱，60mg/3mL): 活化及平衡：3mL甲醇，3mL水 上样：加入提取液3mL 淋洗：3mL水；3mL甲醇；弃去淋洗液并将小柱抽十。 小洗脱：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇)。 e)浓缩：50°C，氮气吹十，20%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生后GC/MS分析。 3.2HPLC检测方法 3.2.1三聚氤胺HPLC-UV检测方法 三聚氤胺是强极性化合物，在传统的反相C18柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离，按照美国食品药品监督管理局(FDA)的三聚氤胺检测方法和中国农业部公布的三聚氤胺检测方法，采用艾杰尔(Agela)ASB系列亲水色谱柱，可以得到良好的分离效果，分析色谱图如下： 图2VenusilASB色谱柱分离三聚氤胺的谱图 色谱柱：VenusilASBC84.6X250mm；标准：FDA方法；流动相：缓冲液：乙腈二85：15；缓冲液：10mM柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0；流速：1.0mL/min；柱温：40oC；波长：240nm 色谱柱：VenusilASB-C184.6X250mm；标准：中国农业部颁标准方法；缓冲液：10mM柠檬酸，10mM庚烷磺酸钠；流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15；流速：1.0mL/min;柱温：40°C；波长：240nm 空白加水平(mg/L)回收率0.01116%0.1108%0.592%296% 3.2.2三聚氰胺LC-MS检测方法 由于FDA公布的HPLC-UV方法中，流动相添加了离子对试剂，因此限制了液质联用方法的使用；但不用离子对试剂色谱方法，三聚氤胺在传统的C18柱上保留很差，不能得到较好的分离定量〔3〕。 基于此问题，艾杰尔科技公司自主开发了新的方法，采用艾杰尔(Agela)ASB系列亲水色谱柱，不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离。因此方法中流动相不含离子对试剂，可以用于质谱检测。 与FDA2007年4月公布的《UpdatedFCCDevelopmentalMelamineQuantitation(HPLC-UV)》相比较，该方法大大降低了最低检测限(MSD：0.5ppm；UV：2ppm)，提高了检测灵敏度。 以该方法分别在ASB-C84.6X250mmASB-C184.6X250mm得到的谱图如下： 图3LC-MS方法检测三聚氤胺的谱图 缓冲液：10mM的NH4AC；流动相：Buffer:：ACN=95：