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连钱草中总黄酮的含量测定 连草是嘴唇科植物的活血丹glechoma（nakai）kubre，干燥的土壤。具有润水、解毒、散肿瘤的功效。临床上可用于治疗热淋、石淋、湿热黄疸等疾病。在我国,连钱草资源十分丰富,几乎分布于全国各地。目前,国内外对连钱草所含化学成份的研究还处于起步阶段,有文献报道:连钱草含有较多的黄酮类化合物,并采用紫外—可见分光光度法测定连钱草中总黄酮的含量,发现不同产地、不同批号的该品总黄酮含量差异较大。为了控制连钱草的质量,保证临床疗效,笔者以连钱草总黄酮为考察对象,采用紫外—可见分光光度法,测定于不同采收期的采集的连钱草中总黄酮的含量,探讨不同采收期对连钱草中总黄酮含量的影响,为连钱草的采收和质量评价提供了实验依据。 1 连钱草的鉴定 751—G分光光度计(上海分析仪器厂);TG—328分析天平(上海分析仪器厂) 连钱草经鉴定为植物活血丹Glechoma longituba(Nakai)Kupr.的干燥地上部分(自己采集);芦丁对照品(供含量测定用,中国药品生物制品检定所提供);其它试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 每批0.5g 于云浮市高峰附近采收连钱草,每次采鲜药5批,每批0.5kg。采收期为2003年1~12月,每月15日。采集后阴干,密闭保存,含量测定前粉碎,过2 0目筛,充分混匀,备用。 2.2 供试品溶液的制备 精密称取60℃干燥至恒重的样品粗粉1.0g,置玻璃烧瓶中,加入60%乙醇100ml,水浴加热回流提取60min,提取2次,过滤,合并滤液,放置2 4小时后,过滤,减压回收乙醇,加蒸馏水定溶至1 0 0 m l,即得供试品溶液。 2.3 黄酮连草素含量的测定 2.3.1 测量波长的选择 根据文献,选择测定波长510nm。 2.3.2 芦丁标准液的制备 精密称取120℃常压干燥至恒重的芦丁对照品20.0mg,置于100ml的容量瓶中,加60%乙醇约60ml,密塞,超声使其溶解,放冷,加6 0%乙醇至刻度,摇匀,得芦丁标准液(0.2 0 0 0 m g·ml-1)。 2.3.3 %亚硝酸钠标准品溶液 精密量取芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml,分别置于25ml的容量瓶中,分别加5%亚硝酸钠溶液1ml,摇匀,放置6min,加入氯化铝试液1ml,摇匀,放置6min,再加5%的氢氧化钠溶液10ml,加水至刻度,摇匀,以第一管作空白对照,在510nm处测定吸光度。绘制浓度—吸光度曲线,求出回归方程为y=0.0796A+0.0000493,r=0.9996,线性范围0~0.0458mg·ml-1。 2.3.4 连钱草总黄酮含量的变化 精密量取供试品溶液3.0ml,然后按标准曲线的制备项下方法测定总黄酮含量,结果见表1。 由表可见:从1月~12月,连钱草中总黄酮含量变化范围为3.26%~9.96%,每年1~3月,连钱草总黄酮含量较低,从4月开始,总黄酮含量开始增加,至7、8月总黄酮含量最高,以后随着气温下降,连钱草总黄酮含量逐渐下降,至12月,总黄酮含量已达到较低水平,和1~3月连钱草中总黄酮含量相比没有显著区别。 3 不同采收期对黄酮类成瘾的影响 连钱草资源十分丰富,几乎分布于全国各地,全年皆可采收;但对其所含成份的研究报道较少。有文献报道:连钱草含有较多黄酮类成份,所以,本实验以连钱草中总黄酮为指标,采用分光光度法,考察不同采收期对黄酮类成份的影响。结果表明,7、8月采收的连钱草中总黄酮含量最高,12月至次年4月,连钱草中总黄酮含量最低。本实验为连钱草的采收提供了实验依据。 本实验结果仅限于黄酮类成份的含量变化,连钱草中其它成份的变化规律是否与黄酮类成份的变化一致还有待于进一步研究。 本实验仅考察不同采取期对连钱草中总黄酮的影响,产地、加工、贮存等对连钱草中总黄酮的影响还有待于进一步研究。