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连钱草总多酚的提取及其抗氧化性研究 连金草又名金钱草和血府草，是嘴唇科的一种多年生草本植物。味辛、微苦、性微寒。主要用于利小便, 治疗膀胱结石、肾结石、输尿管结石、肾炎水肿、湿热黄疸等病症。有关研究表明, 连钱草有降糖作用。植物多酚具有降血脂和降血糖的双重作用。目前, 对于连钱草的研究主要以化学成分、挥发油成分居多, 有关连钱草多酚提取的系统性研究尚未见报道。本试验用乙醇浸取法对连钱草的多酚进行提取并对其抗氧化性进行研究, 以期为连钱草的进一步开发利用提供参考依据。 1 材料和方法 1.1 化学试剂及试剂 供试材料:连钱草 (购于泉州药店) 。 药剂:无水乙醇 (恒隆化工服份有限公司) , 七水合硫酸亚铁、焦性没食子酸 (国药集团化学试剂有限公司) , 酒石酸钾钠 (天津基准化学试剂有限公司) , 磷酸二氢钾 (广东汕头西陇化工公司) , 磷酸氢二钾 (汕头市西陇化工有限公司) 。 仪器:电子天平 (上海舜宇恒平科学仪器有限公司) , 循环水真空泵 (河南省予华仪器有限公司) , 离心机 (上海安亭科学仪器厂制造) , 料理机 (山东九阳家电有限公司) 。 1.2 焦性没食子酸标准液吸光度的测定 根据Folin-Ciocalten法, 以焦性没食子酸为标准品, 采用可见分光光度法测定连钱草的多酚含量。取0.25 mg/m L焦性没食子酸标准液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 m L, 分别置于25 m L的容量瓶中, 加去离子水5 m L, 酒石酸铁溶液5 m L, 用p H 7.5的磷酸盐缓冲溶液定容。振荡混匀静置后, 在波长为540nm下测其吸光度。以焦性没食子酸标准液浓度为横坐标, 以吸光度为纵坐标, 绘制标准曲线。 1.3 料液比及时间 将连钱草清洗干净, 60℃烘干, 烘干后粉碎过40目筛。称取1.000 g连钱草粉末, 放入小烧杯中, 控制单因素条件浸提总多酚。 (1) 乙醇体积分数。分别用不同体积分数 (30%、40%、50%、60%、70%) 的乙醇为提取剂, 料液比1∶25, 在60℃下提取2 h; (2) 料液比。分别用不同的料液比 (连钱草∶乙醇) (1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35) (g∶m L, 下同) , 乙醇体积分数60%, 温度60℃提取2 h; (3) 时间。乙醇体积分数60%, 料液比1∶30, 在60℃下不同时间 (1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h) 下提取; (4) 温度。乙醇体积分数60%, 料液比1∶30, 分别用不同的温度 (40、50、60、70、80℃) , 提取2 h。 将提取液趁热抽滤, 并将其转移至50 m L容量瓶中, 用同体积分数乙醇溶剂定容。从中量取1 m L置于10 m L的容量瓶中, 加入1 m L酒石酸亚铁溶液, 用p H 7.5的磷酸盐缓冲溶液定容, 混匀、静置、离心后在540 nm波长下测定其吸光度, 参照标准曲线计算出连钱草中多酚的含量。 1.4 确定浸提连钱草总多酚最佳条件的正交试验 在单因素试验的基础上, 以乙醇体积分数、温度、时间和料液比4个因素进行L9(34) 正交试验, 确定浸提连钱草中总多酚的最佳条件。正交试验因素和水平如表1所示。 1.5 浸提液用量的确定 依次取9 mmol/L Fe SO4、8.82 mmol/L双氧水、9 mmol/L水杨酸溶液各2.0 m L于25 m L容量瓶中, 向反应体系中分别加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 m L浸提液, 用去离子水定容, 摇匀, 恒温37℃下, 在波长510 nm处测其吸光度值 (AX) , 按此方法不加浸提液测定吸光度值 (A0)。按照公式:清除率= (A0-AX) /A0×100%, 计算连钱草中总多酚的抗氧化性。 2 结果与分析 2.1 标准曲线的绘制 以焦性没食子酸标准液浓度为横坐标, 以吸光度值为纵坐标绘制标准曲线, 得到的标准曲线如图1所示。回归线方程为Y=-0.011 86+16.474 29×X。 2.2 上升趋势分析 从图2可以看出, 随着乙醇体积分数的升高, 连钱草总多酚含量呈上升趋势。当乙醇体积分数为60%时, 连钱草总多酚含量达到最高, 含量为2.515mg/g, 而后随着乙醇体积分数的升高, 连钱草总多酚含量开始下降。因此, 选择乙醇体积分数为60%为宜。 2.3 溶剂用量的影响 由图3可知, 在溶剂用量较小时, 连钱草总多酚含量较低, 加大溶剂用量, 总多酚溶出率增大。当料液比为1∶30时, 连钱草总多酚含量最高。如果继续加大溶剂量, 连钱草总多酚含量反而下降。因此, 选择料液比1∶30为宜。 2.3 浸提时间的确定 由图4可知, 时间较短时, 浸提得到的连钱草总多酚含量较低, 随着时间的延长, 其总多酚不断溶出