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连钱草的小鼠灌胃急性毒性实验研究 连草原植物是活血草（nakai）kuber，是嘴唇科植物。具有利湿通淋、清热解毒、散瘀消肿的功能(见图1) 。主治尿路感染、疳积、黄疸、感冒、肺痈、咳嗽、小儿惊风、跌打扭伤、骨折、风湿性关节炎。在湖北省民间常口服用于腹泻的治疗, 具有较好的疗效。鉴于目前尚未见有关其确切安全剂量的文献报道, 我们对其最大耐受量进行了测定, 以便为临床应用和相关研究的剂量设置提供参考。 1 材料表面 1.1 药渣浓缩法 连钱草 (自行采集于武汉大学珞珈山, 经湖北中医学院中药鉴定教研室陈家春教授鉴定) 。连钱草水提物的制备:取适量连钱草干品, 加纯化水浸泡30min后, 加热煮沸, 开始用强火, 沸腾后改用文火煮沸30min, 搅拌, 趁热过滤, 药渣再加纯化水同法煮沸30min后过滤, 合并滤液, 水浴浓缩至100% (含生药1g·mL-1) 备用。连钱草醇提物的制备:取连钱草干品适量, 加95%乙醇于圆底烧瓶中, 浸泡6h后水浴加热回流1h, 趁热过滤, 药渣再用75%乙醇加热回流1h, 过滤, 合并滤液, 减压回收乙醇浓缩至100% (含生药1g·mL-1) 备用。 1.2 动物体重202g 昆明种小鼠18～22g, 雌雄各半, 体重 (20±2) g。由湖北省卫生防疫站动物实验中心提供。动物许可证号:SCXK鄂-2004-0109。 2 方法和结果 2.1 小鼠骨髓提物连钱草水提物急性毒性试验 昆明种小鼠30只, 雌雄各半, 随机分为6组, 禁食不禁水12h。以最大给药容积 (按每10g体重给药0.3mL) , 不同剂量的连钱草水提物和醇提物1次灌胃, 连续观察7d, 记录期间小鼠死亡数和一般情况。预实验结果表明, 连钱草水提物和醇提物的各自的3个剂量均无1例死亡, 也未出现明显中毒现象。可知本药的毒性较小, 半数致死量 (LD50) 不能测出, 故采用测定小鼠最大耐受量 (MTD) 来测定药物对小鼠的急性毒性作用。 2.2 小鼠的急性毒性试验 取昆明种小鼠30只, 体重 (20±2) g, 雌雄各半, 禁食不禁水12h。将连钱草水提物与醇提物浓缩至4g·mL-1, 以0.4mL/10g (即160g生药·kg-1) 灌胃, 另设空白对照组, 给予等体积生理盐水。连续观察7d, 详细记录试验动物每天反应及体重变化、摄食量变化和死亡情况。 实验结果表明, 以最大给药浓度、最大给药剂量1次灌胃给药, 灌胃后部分小鼠出现自主活动减少、静卧不动、闭目、反应迟钝等反应, 但无竖毛、懒动、抽搐、翻倒等异常情况, 连续观察7d, 小鼠无出现死亡情况, 体重增长。实验结束时, 称重, 将全部动物处死, 解剖, 肉眼观察其心、肝、脾、肺、肾等主要组织脏器的外观, 均无明显的毒副作用, 可见此药对小鼠并无明显的毒副作用。 连钱草水、醇提物最大耐受为160g·kg-1, 最大耐受倍数以以下公式计算, 结果如下: 小鼠最大耐受倍数= (每只小鼠耐受药量/小鼠平均体重 (20g) ) × (成人平均体重 (50000g) /成人每日用量) (倍) = (3.2.20) × (50000/30) =266倍 连钱草水、醇提物最大耐受倍数均为266倍, 表明:连钱草提取物实际无毒。 由试验可知, 连钱草提取物以最大浓度及最大给药量给药, 小鼠不出现死亡和明显的中毒情况, 此时, 小鼠的日用剂量为160g·kg-1, 相当于成人日用量的266倍, 故连钱草提取物的安全性较高。 3 急性毒性试验 急性毒性试验是在1天内单次或多次 (2～3次) 对动物给药后, 在7天内, 连续观察动物所产生的毒性反应及死亡情况。急性毒性试验中如受试药物引起动物死亡, 应测定药物毒性反应与剂量的关系, 通常进行半数致死量LD50测定, 当受试药物测不出LD50时, 可以做最大给药量试验来考察动物的急性毒性情况。 急性毒性试验表明, 连钱草提取物毒性作用极小。用LD50已不能测出其毒性, 故只能测定其最大耐受量。最大给药量的耐受倍数反映了该药的安全性, 本药的最大给药量的耐受倍数相当于临床拟用日剂量的266倍, 表明其毒副作用相当微弱。但急性毒性试验仅1次或数次给药, 观察时间较短, 仅7d, 故还应结合长期毒性试验的毒性表现及多种检查结果综合分析评价其毒性。