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连钱草提取物对肾结石模型大鼠的防治作用 尿石症是尿石科的常见病和常见病。发病率高，治疗后复发率高。中医的辨证论治对预防尿潴留也有很大的前景。中医治疗尿路结石的特色在于把改善体质、消除产生结石的病理状态与促进排石结合起来。连钱草是唇形科活血丹Glechoma longituba (Nakai) Kupr.的干燥地上部分, 具有利湿通淋、清热解毒、散淤消肿的功能, 有治疗热淋、石淋、湿热黄疸、疮痈肿痛等作用。临床上主要用于利小便、治疗肾结石、膀胱结石、输尿管结石、肾炎水肿、湿热黄疸、胆囊炎、胆石症等。现代药理研究表明, 连钱草水煎剂具有显著利尿作用, 并有利胆、溶解结石作用, 文献报道连钱草主要含有有机酸类、黄酮类、萜类等活性成分。本实验观察连钱草水提醇沉提取物对肾结石模型大鼠的防治作用, 并初步探讨其作用机制。 1 材料和方法 1.1 材料和试剂 1.1.1 实验动物的测定 SPF大鼠, ♂, 体质量29~34 g, 实验动物质量合格证号码:SCXK (浙) 2012-0001, 由浙江省实验动物中心提供。 1.1.2 试剂与试剂盒 连钱草药材采自江苏淮安 (批号:110911) , 由南京中医药大学杨念云副研究员鉴定为Glechoma longituba (Nakai) Kupr.的干燥地上部分;钙检测试剂盒 (批号 、血清尿素氮检测试剂盒 (批号 、肌酐检测试剂盒 (批号 均购自南京建成生物技术公司;变色酸 (上海研拓生物科技有限公司产品, 批号 。排石颗粒 (南京同仁堂药业有限责任公司, 批号 规格:20 g·袋-1) ;乙二醇 (批号 、氯化铵 (批号 均购自国药集团化学试剂有限公司。 1.2 方法 1.2.1 制备浸膏,制备成醇 取连钱草 (干燥) 8 kg, 加蒸馏水煎煮提取2次, 每次60 000 m L, 每次2 h, 提取液合并后, 在减压回收器上减压回收溶剂, 浓缩至8 000 m L, 药液放冷后, 边搅拌边缓慢加入乙醇使含醇量达60%, 密闭冷藏24 h, 上清液回收溶剂, 得到浸膏620 g。采用高效液相色谱法对连钱草水提醇沉上清液进行分析测定, 结果表明主要含有咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸等有机酸类成分和木犀草苷、大波斯菊苷等黄酮类成分, 结果见图1。 1.2.2 单次给药与肾组织病理学检查 大鼠自由摄食和饮水, 实验前观察适应一周。随机分为6组, 每组10只:正常对照组, 给予正常饲料;模型组, 每天让大鼠饮含1%乙二醇、1%氯化铵的自来水;阳性药组, 给予排石颗粒 (每日以1 g·kg-1灌胃给药) 与造模饮水;连钱草高、中、低浓度剂量组, 分别给予连钱草 (每日以1 000, 500, 250 mg·kg-1连钱草上清液提取物浸膏灌胃给药) 与造模饮水。4周后结束实验。实验结束前1 d用代谢笼分别收集各大鼠24 h空腹尿液, 测定24 h排尿量。末次给药1 h后, 大鼠采血, 离心取上层血清用于测定血清钙含量。大鼠处死后取右肾10%甲醛溶液固定, 用于肾组织病理学检查;左肾超低温 (-80℃) 保存, 肾组织匀浆, 用于测定肾组织总钙 (Ca2+) 和肾组织草酸含量。 1.2.3 统计学处理方法 实验数据均以ue0af±s表示, 并采用SPSS 13.0统计软件进行数据整理和统计, 各组间比较采用单因素方差分析。P0.05为差异显著, P0.01为差异非常显著, 具有统计学意义。 2 结果与分析 2.1 肾皮质肾间质血管培养 正常对照组大鼠肾未见肾小管上皮细胞变性、坏死, 肾间质未见血管充血、水肿和炎细胞浸润;肾皮质肾小囊内未见纤维素及炎细胞渗出, 肾小球毛细血管球细胞无增生, 肾小球未见硬化。模型组可见肾小管上皮细胞水样变性萎缩, 部分上皮坏死脱落, 部分肾小管扩张严重, 部分肾小管中可见大量结石, 肾间质血管充血较严重。连钱草提取物低剂量组可见部分肾小管上皮细胞变性萎缩, 部分肾小管扩张, 部分肾小管中可见少量结石, 肾间质血管充血。连钱草提取物中剂量组和阳性药组可见部分肾小管上皮细胞变性, 部分肾小管扩张, 部分肾小管中可见少量结石, 肾间质血管充血。连钱草提取物高剂量组可见肾小管上皮细胞轻微水样变性, 肾间质血管充血;肾皮质肾小囊内未见纤维素及炎细胞渗出, 肾小球毛细血管球细胞无增生, 肾小球未见硬化。结果见图2。 2.2 肾组织钙及血清钙 与模型组比较, 各给药组大鼠24 h排尿量显著增加 (P0.05或P0.01) 。连钱草中、高剂量组大鼠肾组织钙含量明显降低 (P0.05) , 各给药组大鼠肾组织草酸显著降低 (P0.05或P0.01) 。各给药