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连钱草的化学成分测定 连草是嘴唇科植物的活血丹干燥部位。具有润水、通粘液、清热解毒、祛瘀、止咳、止咳的功效。临床上用于治疗热淋、石淋、湿热黄疸等疾病，没有关于这些成分的研究。通过系统预试发现, 本品含有较多量的黄酮类成分, 为控制其质量, 保证临床疗效, 本研究对其含有的总黄酮进行了含量测定。 1 药品检验所提供的药品 芦丁对照品 (由中国生物制品检定所提供, 批号0080-9705) ;连钱草[Glechoma longituba(Nakai)kupr., 上海市药品检验所提供]。亚硝酸钠 (太仓化工二厂, 批 分析纯) 及三氯化铝 (中国金山区兴塔美兴化工厂, 批号990829, 分析纯) 和氢氧化钠 (威尔昆化学试剂有限公司上海华美药房经销, 批 分析纯) 。UV-2101PC分光光度计 (日本岛津) ;CQ250超声波清洗仪 (上海超声波仪器厂) 。 2 方法和结果 2.1 连钱草粉的制备 精密称取芦丁对照品5 mg, 置于25 ml的容量瓶中, 加60%乙醇约15 ml, 超声使其溶解, 放冷, 加60%乙醇至刻度, 摇匀, 得芦丁标准溶液 (0.2 mg/ml) 。精吸芦丁标准溶液8 ml, 置于25 ml的容量瓶中, 加5%亚硝酸钠溶液1 ml, 摇匀, 放置6 min, 加三氯化铝试液1 ml, 摇匀, 放置6 min, 再加5%的氢氧化钠10 ml, 加水至刻度, 摇匀, 于波长200～800 nm间扫描, 可见在510 nm处有最大吸收。精称2 g连钱草粗粉, 置于具塞锥形瓶中, 加50 ml 60%乙醇, 超声50 min。过滤, 取连钱草续滤液, 不显色, 直接于波长200～800 nm间扫描;取续滤液1 ml, 同对照品芦丁一样显色操作后, 于波长200～800 nm间扫描, 可见在493 nm处有最大吸收, 见图1。 2.2 芦丁标准溶液的制备 精密称取120℃常压干燥至恒重的芦丁对照品21.75 mg, 置于100 ml的容量瓶中, 加60%乙醇约60 ml, 密塞, 超声使其溶解, 放冷, 加60%乙醇至刻度, 摇匀, 得芦丁标准溶液 (0.217 5 mg/ml) 。 2.3 乙醇溶液的配制 取连钱草粉末约0.5 g (同时另取连钱草测定水分) , 精密称定, 置于具塞锥形瓶中, 精密加60%乙醇60 ml, 密塞, 称定重量, 超声50 min。放冷, 密塞, 再称定重量, 用60%乙醇补足减失的重量, 摇均, 过滤, 得续滤液, 即供试品溶液。 2.4 空白对照法 精密量取芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml, 分别置于25 ml的容量瓶中, 分别加水6、5、4、3、2、1、0 ml, 加5%亚硝酸钠溶液1 ml, 摇匀, 放置6 min, 加三氯化铝试液1 ml, 摇匀, 放置6 min, 再加5%的氢氧化钠溶液10 ml, 加水至刻度, 摇匀, 以第一管作空白对照, 在510 nm处测吸光度。绘制浓度-吸光度曲线, 求出回归方程为y=0.085 8A-0.000 059 7,r=0.999 3, 式中y代表对照品浓度 (mg/ml) ,A代表吸光度, 对照品在0～0.043 40 mg/ml范围内呈良好的线性关系。 2.5 容量瓶吸收剂用量 取供试品溶液3 ml, 按标准曲线项下方法, 自“分别置于25 ml的容量瓶中”起, 同法操作, 并每隔1 min测定1次吸光度。结果表明, 供试品溶液与三氯化铝形成的红色络合物不稳定, 显色30 min后吸光度下降约2%, 建议定容后立即测定。 2.6 总黄酮含量测定ls-ls 取同一批号的连钱草粗粉5份, 每份约0.5 g (同时另取本品测定水分) , 精密称定, 然后按供试品溶液的制备和标准曲线的制备项下方法测定总黄酮的含量, 均值为4.22 %, RSD=2.19 % (n=5) 。 2.7 加样回收率试验 取已知总黄酮含量的连钱草约0.18 g, 精密称定, 然后按供试品溶液的制备和标准曲线的制备项下方法测定总黄酮的含量, 计算平均加样回收率。结果平均回收率为102.42%, RSD2.20% (n=5) 。 2.8 样品测定 精密量取供试品溶液3.0 ml, 然后按标准曲线的制备项下方法测定总黄酮的含量, 结果见表1。 3 最佳超声提取时间的确定及含量测定 根据黄酮的性质, 曾尝试用甲醇和不同浓度的乙醇来提取连钱草中的黄酮类成分, 结果显示以50%甲醇与60%乙醇提取率最高, 又考虑到甲醇的毒性, 故最后选用60%乙醇为提取溶媒。最佳超声提取时间的考察是通过精密称定一定量本品粉末, 加一定量的60%乙醇, 分别超声提取10～60 min, 最后确定50 min