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bdlsc移植对大鼠肝组织转化生长因子--smad信号通路的影响 0 upa在肝纤维化中的作用 骨髓源性肝干的血浆（cds）来源丰富，具有很强的抗殖能力，具有很强的肝系细胞分化能力，是肝系统疾病理想的靶细胞。尿激酶原激生物（uromorniza）对降低肝脏疾病的抗生素质化和肝脏纤维化起着重要作用。建议将肝干、upa基因治疗结合起来，28.善安参与坏死组织和降低纤维的空间，促进ugc参与肝组织的培育、移植和分化，重建正常的肝组织结构。它被认为是肝组织形态和功能恢复的最重要因素之一。smad3和smad7是tgf-1后下游的信号转移因素之一。在本研究中，通过人类父母的父母权基因（adupa），转移到肝纤维大鼠体内，评估转移到肝纤维大鼠体内的影响，以及tgf对硫氨酸钠感染的影响。 1 细胞培养和转染 纯系Fisher 344♂大鼠10只,♀大鼠36只,体质量150-180 g,购自中科院上海斯莱克实验动物有限责任公司.其中♂大鼠仅用于提取骨髓干细胞,是供体大鼠,而♀大鼠是受体大鼠.TRIzol购自美国Invitrogen公司,M-MLV逆转录酶购自美国Promega公司.Taq DNA聚合酶购自大连TaKaRa宝生物有限公司.TGF-β1、Smad7兔多克隆抗体和Smad3羊多克隆抗体均购自美国Santa Cruz公司. 1.2 肝组织病理学检测 人pAduPA重组腺病毒质粒由第二军医大学附属长征医院林勇博士惠赠.利用脂质体转染法在293细胞中包装和扩增,用氯化铯梯度离心纯化,AduPA最终病毒滴度可达3×1012μfu/L. 采用淋巴分离液进行密度梯度离心法分离胆总管结扎后10 d大鼠骨髓单个核细胞,使用含5%的大鼠淤胆血清的病理条件培养液筛选培养BDLSC.应用RT-PCR方法检测肝干细胞标志表达. 将♀大鼠随机分为4组,每组9只.(1)正常组:皮下注射等量橄榄油;(2)模型组:予40%CCl4(CCl4∶橄榄油=2∶3,3 mL/kg)皮下注射,3 d注射1次,首剂加倍,共注射18次,并经尾静脉注射等量生理盐水;(3)BDLSC组:造模方法与模型组相同,于实验第4周经尾静脉输入2×106BDLSC;(4)BDLSC-uPA组:造模方法与模型组相同.AduPA以感染复数(multiplicity of infection,MOI)500转染BDLSC,72 h后收集BDLSC溶于生理盐水,于实验第4周经尾静脉导入2×106转基因BDLSC.细胞移植后应用免疫抑制剂他克莫司灌胃,0.1 mg/(kg d).各组大鼠于第8周处死,留取血清及肝组织. 以甲醛固定矢状肝组织切片,常规石蜡包埋.制备5μm厚肝组织切片用于HE染色. 取各组大鼠血清1.5 mL,使用自动生化分析仪检测肝功能指标丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)和白蛋白(albumin,ALB). 将石蜡切片脱蜡至水,微波抗原修复10 min,加3%H2O2后于室温下孵育20 min;加正常封闭羊血清,室温下孵育20min;弃去羊血清,加入一抗(TGF-β1:1∶200),于4℃中过夜;次日加对应二抗,37℃中孵育45min;DAB显色,显微镜下观察适时终止反应,苏木素复染,脱水封片.每个动物随机选取3张石蜡切片重复实验,每张切片随机选取10个视野,应用Image-Pro plus 5.1图像分析软件计算每个视野的阳性染色百分比进行统计. 统计学处理计量资料以mean±SD表示,采用SPSS12.0统计软件包进行单因素ANOVA或Kruskal-Wallis检验分析.P0.05为显著性界值. 各组大鼠肝组织切片HE染色结果显示:模型组肝组织呈广泛而严重的肝细胞脂肪变性坏死,门脉及中央静脉周围炎症细胞浸润,汇管区扩大,大量纤维组织增生,假小叶形成,而BDLSC-uPA组肝细胞变性坏死、炎症细胞浸润及纤维组织增生明显减轻(图1). 大鼠血清肝功能检测结果显示:与正常组相比,肝纤维化模型组血清ALT、AST和TBIL水平均显著升高,ALB水平显著下降(P0.05);与模型组相比,BDLSC-uPA组大鼠血清ALT、AST和TBIL水平均有不同程度的降低,ALB水平升高(P0.05,表1). Western blot结果经计算机灰度扫描并与内参照(β-actin)比较分析显示:与模型组(0.8202±0.0636)和BDLSC组(0.2936±0.0548)相比,BDLSC-uPA组的肝组织T G F-β1蛋白表达量(0.1849±0.0456)均明显减低(P0.05,图2).免疫组织化学分析显示TGF-β1蛋白