注射用脉络宁对血管闭塞性脉管炎大鼠模型的影响.docxVIP

注射用脉络宁对血管闭塞性脉管炎大鼠模型的影响 血栓闭塞性脉管炎是周围血管慢性闭塞性炎症之一。伴有复发性神经变化，主要发生在四肢中部、小动脉和静脉，通常可见下肢。其临床特点为患肢皮肤发凉、间歇性跛行、肢体酸胀、麻木、受累动脉搏动减弱或消失,伴有游走性血栓性浅表静脉炎,严重者有肢端溃疡或坏死,是我国慢性周围血管病中较常见的病种。脉络宁注射液是由牛膝、玄参、石斛、金银花等制备而成,临床用于血栓闭塞性脉管炎、静脉血栓形成、动脉硬化性闭塞症、脑血栓形成及后遗症。注射用脉络宁是棕红色的疏松状固体制剂,本研究旨在观察注射用脉络宁静脉注射给药对大鼠实验性血栓闭塞性脉管炎以及血液流变学等的影响。 1 血管闭塞性脉管炎大鼠临床模型的建立 1.1动物 SD雄性大鼠60只,体重280~320 g,由中国科学院上海分院动物中心提供,动物合格证号:SCXK(沪)2002-0010。 1.2药品与试剂 注射用脉络宁,山西亚宝药业有限集团公司提供,批号月桂酸由国药集团化学试剂有限公司生产,批号:快速医用胶508系列,广州白云医用胶有限公司生产,批号:050201;脉络宁注射液,南京金陵药业股份有限公司南京金陵制药厂生产,批号:0411111。 1.3仪器 LBY-N6B自清洗旋转式粘度计,由北京普力生公司生产。 1.4方法 60只大鼠随机为假手术组、病理模型组(简称模型组)、脉络宁注射液对照组、注射用脉络宁低、中和高剂量组共6组,每组10只。参照文献方法稍加改进,制作大鼠血管闭塞性脉管炎(TAO)模型:将大鼠用10%水合氯醛3 ml/kg腹腔注射麻醉,仰位固定后,右下肢股内侧剪毛。碘伏皮肤消毒,纵行切开,1.5~2.0 cm切口,游离股动脉,夹闭阻断血流,假手术组于动脉夹下方远心端注入0.2 ml生理盐水,其余大鼠于动脉夹下方1.0 cm处向近心端注入0.2 ml月桂酸,直至血管明显充盈,略显白色而无明显肿胀时,轻柔取针,用医用粘涂胶封针孔。各组均于注射后15 min去掉动脉夹,观察结果。第3 d尾静脉注射给药,模型组及假手术组静注生理盐水(1 ml/100g)每天1次,连续给药7 d。 1.4.1大鼠体征变化:观察大鼠患肢皮肤温度、颜色、动脉搏动、患肢肿胀程度、坏疽和木乃伊化的病变程度和范围。参照王军等采用的分级标准分级,Ⅰ级:病变局限于趾甲部;Ⅱ级:病变局限于趾部;Ⅲ级:病变局限于足爪部;Ⅳ级:病变局限于膝关节以下;Ⅴ级:病变发展到膝关节以上。 1.4.2病理切片血栓分级:取大鼠右下肢,10%福尔马林液固定3 d后用10%硝酸脱钙,足趾、踝关节上、下及股部4个部位横断切片,HE染色,对血栓进行分级,0级:无血栓;Ⅰ级:1个血栓;Ⅱ级:2~3个血栓;Ⅲ级:4个以上血栓。同时分别对动脉壁炎性细胞浸润、纤维增生及血栓机化与再通等情况进行观察。 1.4.3血液流变学检查:大鼠分别断头取血4 ml,置于肝素试管中,采用LBY-N6B型自清洗旋转式粘度计,测量大鼠全血粘度、血浆粘度、红细胞压积。 1.5统计学处理 实验数据用Xˉˉˉ±SDXˉ±SD表示,计数等级资料采用秩和检验,计量资料采用SPSS 10.0软件进行单因素方差分析处理。 2 结果 2.1 各组大鼠的临床病理情况比较 大鼠经股动脉注入月桂酸造模后,约5 min后开始出现患肢足爪部变苍白继而青紫,皮肤温度降低,动脉搏动减弱或消失,次日受累足趾变黑,并逐渐向上发展,形成坏疽及木乃伊化。少数动物手术后表现为患肢疼痛、跛行和曳行现象。一周内少数大鼠出现患侧坏疽部分脱落,模型组的病变最严重,注射用脉络宁中、高剂量组的病变最轻,与模型组比较有显著性差异(P0.05),而假手术组未出现病变表现,各组与假手术组比较均具有非常显著性差异(P0.01)。结果见表1。 2.2 管路无血栓形成 假手术组手术区组织均有轻微粘连,有轻度炎细胞浸润,以淋巴细胞为主,但股动脉均呈通畅状态,内膜光滑,血管内无血栓形成;经造模后TAO模型大鼠患肢动脉内均有不同程度的血栓形成,注射用脉络宁3个剂量组和脉络宁注射液对照组大鼠的血栓数明显减少,程度非常显著降低(P0.01),注射用脉络宁中、高剂量组大鼠未发现血栓机化现象,血栓再通数增多,动脉内皮增生及中膜与外膜的炎细胞浸润程度均明显低于模型组。结果见表2。 2.3 各组血浆比粘度和高切变率的比较 假手术组与TAO模型组相比,血液流变值(含血浆粘度及全血粘度)差异有非常显著性(P0.01),而红细胞压积无显著差异;注射用脉络宁三个剂量组及脉络宁注射液对照组与模型组比较:血浆比粘度均非常显著降低(P0.01),全血比粘度中低切变率下均非常显著降低(P0.01),中切变率下低剂量组显著降低(P0.05),而其它各剂量组均非常显著降低(P0.01);在高切变