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氯化锂-重复低剂量匹罗卡品致痫大鼠模型的建立 癫痫是神经系统疾病中的第二个常见疾病。这是成年期最常见的持续性癫痫，虽然没有关于病因和发病机制的清楚信息。由于伦理问题,很难用人脑进行研究,近几十年来制作了大量的癫痫模型来模拟人类癫痫进行研究,各个模型均有其优缺点。本实验参照Glien等于2001年报道的氯化锂-重复低剂量匹鲁卡品大鼠癫痫模型,进行了部分改良及探讨,现汇报如下。 1 材料和方法 1.1 干预给药分组 取体重190~260g雄性健康SD(Sprague-Dawley)大白鼠173只(第三军医大学大坪医院野战外科研究所实验动物中心提供),随机分为对照组(N),诱发成功后干预A组(90min给药),干预B组(30min给药)和C组(60min给药),共4组,每小组分别为3、60、50、60只。 1.2 racine分级标准 参照Glien等文献,具体步骤如下:A、B、C各组均先IP3m Eq/kg氯化锂,19h后再给予匹罗卡品10mg/kg IP,每隔30min 1次,重复2~4次,抽搐行为评价采用经Becker等修改后的Racine分级标准,即0级:无反应;Ⅰ级:耳面部抽搐;Ⅱ级:肌阵挛,但无直立位;Ⅲ级:肌阵挛,伴直立位;Ⅳ级:全身强直阵挛发作;Ⅴ级:全身强直阵挛发作,并失去体位控制。A组大鼠匹鲁卡品急性致痫达Ⅲ级以上并持续90min及以上时IP 3.5%水合氯醛(1ml/100g鼠重),B组大鼠在出现Ⅲ级以上发作并持续30min时IP 3.5%水合氯醛;C组大鼠在出现Ⅲ级以上发作,并持续60min时IP 3.5%水合氯醛;N组大鼠腹腔注射相同剂量的生理盐水代替匹鲁卡品,其余处理同A组。A、B、C组大鼠诱发成功后观察120d。注射匹鲁卡品后不出现急性Ⅲ级以上癫痫持续发作(即癫痫持续状态)的大鼠不纳入本研究。 1.3 癫痫大鼠的观察 急性致痫后,从第4d起,每日由接受过训练的实验人员轮流连续8h观察大鼠的行为学表现,注意有无自发性癫痫发作及其潜伏期和发作的严重程度。 1.4 脑电活动测定 分为急性期和慢性期颅内脑电图,用5根电极,左右两侧颅内额叶皮质下及海马各1根,鼻根额窦处插入1根为参考电极,在二道生理记录议上描记脑电活动,1%戊巴比妥(45mg/kg)麻醉下采集脑电图,每只累计记录时间不得少于12 h,每次连续记录时间不少于30min,白天和晚间不同时间点均记录。 1.5 统计分析 数据以均数±标准差表示,均数行ANOVA分析,各分组均数间两两比较行q检验。 2 结果 2.1 大鼠癫痫持续状态 SD大鼠月龄平均2.4月(2~4月)体重平均230g(190~260g),匹鲁卡品用量范围10~40mg/kg,平均为25.9mg/kg,实验总诱发成功率为73%(127/173),分别1剂成功率占9%,2剂成功率占45%,3剂成功率占32%,4剂成功率占14%。50%的大鼠仅用2剂便发展为癫痫持续状态。观察到4剂之后(5、6、7、8剂)出现癫痫持续状态4只,个别10~16剂也未成功,因此癫痫的诱发成功率接近于全和无。SE在120~180min被中断,死亡率为46%,120min被中断,死亡率为40%;90min被中断,死亡率为9.7%,低于10%,与N组、B组、C组比较有显著差异(P0.01),而N组、B组、C组3组间比较无差异。诱发急性癫痫发作时行为方面没有差别,SE开始时间短平均为16min,达Ⅳ/Ⅴ级。 2.2 动物癫痫模型 癫痫持续60min者几乎所有大鼠发展为自发性癫痫,反复发作的占83%,潜伏期11~69d,平均潜伏期约33d,癫痫发作通常为面肌部分性发作Ⅰ/Ⅱ级发展为全面性发作,达Ⅳ/Ⅴ级,通常持续30s(平均为27s,8~85s),发作程度绝大多数不严重,仅少数严重发作而死亡,占6.8%。自发性癫痫发生率通常达0~22次/周,平均3.8次/周,仅1只大鼠每天发作1次。30min、60min、90min及以上和SE诱发总成功率见表1。部分自发性癫痫大鼠出现少有行为变化,如攻击行为、频繁活动、极度兴奋等。 对照组大鼠皮层电极EEG无异常,98%(125只占122只)模型鼠额叶皮质及海马EEG示频繁自发的棘波、尖波、棘慢波等发放。B组脑电异常,C组明显异常,A组严重异常。 3 氯化锂-重复低剂量匹罗卡品诱导癫痫模型的死亡率和质量检测 理想的颞叶癫痫动物模型应具备行为学方面类似近中央颞叶硬化的自发性复杂部分发作或继发全面性发作,反复抽搐,而且脑电图、病理学特征及病理生理方面类似颞叶癫痫。氯化锂-重复低剂量匹罗卡品诱导的癫痫发作类似颞叶癫痫,可用于人类颞叶癫痫发病机制的研究。 本试验在预试验时参照Glien等文献,选择安定终止癫痫的发作,发现绝大多数大鼠连用几剂、在几十分钟内均难中止癫痫的发作,导致癫痫发作时间远大