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碱性亚硫酸盐预处理桉木原料的研究 木质素资源是植物通过光合作用产生的有机资源，主要由三种高度组成的高科技材料组成，如树木、农业和食品。随着世界上最丰富的碳氢化合物资源的匮乏，人类生物福利的利用生物技术的普及对提高木生动物的生物化学具有重要意义。通过酶水解，我们可以将木生动物的纤维和半素转化为单糖、低聚糖、苯甲酸和其他附加费产品，从而提高其利用率。这是目前生物科学领域的研究热点。然而，由于天然纤维表面对生物酶的抗逆性，直接酶处理的效率低，因此需要进行一定的预处理，以提高表面与酶的结合。目前，最常用的预处理方法是碱级甲环酸盐预处理、热提取、蒸汽爆炸预处理、稀酸预处理、氨水和有机溶剂预处理。其中，碱性硫酸钠预处理对其他预处理具有一定的优势：（1）与酸性预处理相比，对设备的腐蚀性预处理相比较少，并且在预处理过程中不存在对硝胺等发酵抑制剂的影响；（2）在碱性碱性硫酸盐预处理过程中，木质素的部分磺化可以改善纤维素和亲水性纤维素的结合，提高后续纤维素酶的酶分解效率。基于上述原因，本文以桉树为原料，采用碱性碱性硫酸盐预处理，研究了预处理前后样品的成分和结构，通过其他酶分解实验研究了这种预处理方法对酶分解和糖化的促进作用。 1 实验 1.1 纤维原料的制备 实验所用桉木木片由福建龙岩某厂提供,木片经植物粉碎机粉碎后,取40～60目木粉备用. 实验所用纤维素酶由杰能科公司提供,其主要成分为木聚糖酶和β-葡萄糖苷酶,采用DNS法测得其酶活为140 FPU/mL. 1.2 采用gmn-400型高浓磨浆 原料经风干后在电加热回转式蒸煮锅中进行碱性亚硫酸盐预处理.预处理具体条件为:固(质量,g)液(体积,mL)比1∶3,NaOH用量3%(质量分数,以绝干桉木粉质量为基准计,下同),Na2SO3用量12%,60 min从室温升至170 ℃,保温时间2 h.预处理结束后,采用天津轻工机械厂生产的GNM- 300型高浓磨浆机进行分段磨浆,其中一段磨盘间隙0.4 mm,二段盘磨间隙0.1 mm. 1.3 酶解液的糖含量及酶解渣的活性 精确称取桉木木粉及预处理后浆料各8 g(绝干),在恒温振荡器内进行纤维素酶酶解.酶解条件:温度50 ℃,酶用量40 FPU/g(以每克固体浆料计),固液比1∶20,酶解时间60 h,乙酸-乙酸钠缓冲液pH4.8.酶解完成后,离心取其上清液用戴安公司生产的Dionex ICS- 3000型高效阴离子交换色谱(CarboPACTM PA1阴离子交换柱,ED检测器,柱温30 ℃,流速0.650 mL/min)分析酶解液中的单糖含量.酶解葡萄糖(木糖)转化率按下式计算: 葡萄糖(木糖)转化率=V酶×ρ糖m浆W1×1000×0.95Q1×100%, 式中:0.95为转化率校正系数;V酶为酶解液的体积,mL;ρ糖为酶解液中葡萄糖(木糖)含量,mg/mL;m浆为预处理后用于酶解的浆料质量,g;W1为预处理后浆料得率,g/g;Q1为原料中葡萄糖(木糖)含量,%. 酶解残渣经冷冻干燥后,再用72%硫酸法测其残留的糖组分和木质素含量.酶解残渣中木质素转化率按下式计算: 木质素转化率=m渣×W2m浆W1×Q2×100%, 式中:m渣为酶解残渣质量,g;W2为酶解残渣中木质素含量,%;Q2为原料中木质素含量,%. 1.4 分析与表现 1.4.1 ft-ir分析 采用KBr(光谱纯)盐压片法在美国Thermo Nicolet公司Nexus系列FT-IR红外光谱仪上测定预处理前后的样品及酶解残渣的FT-IR谱图,扫描范围为400～4 000 cm-1. 1.4.2 纤维素及半纤维素含量的测定 纤维素含量的测定采用硝酸-乙醇法,木质素含量的测定采用72%硫酸法,综纤维素含量的测定采用次氯酸钠-乙酸法,半纤维素含量为综纤维素含量与纤维素含量之差. 1.4.3 电镜分析 采用JSM- 5500LV型扫描电子显微镜对预处理前后的样品及酶解残渣进行分析,观察其内部纤维素的结构变化. 1.4.4 结晶度的计算 在德国Bruker公司生产的XRD- 6000型X射线衍射仪上测定预处理前后的样品及酶解残渣的结晶度.Cu靶,扫描范围5°～80°.根据Segal公式计算相对结晶度: Cr=(I002-Iam)/I002×100%, 式中,Cr为相对结晶度,I002为002面衍射峰的极大强度,Iam为衍射角为18°时非结晶背景的散射强度. 2 结果与讨论 2.1 桉木糖和木糖营养成分比较 采用72%硫酸法,测得桉木原料中各单糖及木质素含量如表1所示.由表1可见,桉木原料中的糖组分主要是葡萄糖和木糖,除此之外,含有少量的半乳糖和阿拉伯糖,未检测到甘露糖.桉木半纤维素中,木糖是主要成分,其含量约占半纤维素的70%.相对于草类植物,桉木的Klason木素含量较高,这与Yu Qiang等