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假单孢杆菌pke117对木材的降解研究 木质素是自然界的第二大有机碳来源。它具有香味浓郁，难以分解。同时,也是造纸黑液的主要成分,使造纸废水的处理十分困难,造成严重的水污染。 目前已知的木材腐朽菌包括真菌、放线菌和细菌,其中具有降解木质素能力的白腐真菌是一直以来研究的重点。而细菌由于其所分泌的木材降解酶基本上都是胞内酶,对于细菌降解木材的研究一直处于从属地位。 假单孢杆菌(Pseudomonas)是细菌中对木材降解效果较好的一种。本研究使用的假单孢杆菌PKE117经实验证明具有分泌胞外木素降解酶的能力。用该菌种对巨尾桉、加拿大杨和长白落叶松这三种常见木材进行降解。通过测定木材降解率发现,该菌种具有较强的降解木材的能力,尤其对松木的降解能力很突出。用元素分析、红外光谱、固相核磁等手段对降解前后的木材结构变化进行分析,发现木材结构中的纤维素和木质素结构都发生了一定程度的变化,证明该菌种具有降解纤维素和木质素的能力。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 病毒 假单孢杆菌PKE117,北京大学环境工程实验室保存。 1.1.2 木材 巨尾桉(优6),廉江;加拿大杨,怀柔北溟林场木材加工厂;长白落叶松,怀柔北溟林场木材加工厂,分别记为A、Y、S。 1.1.3 灭菌、灭菌 固体斜面培养基:牛肉膏0.3%,蛋白胨1%,NaCl 0.5%,琼脂1.5%,121℃下灭菌30min。 无机盐营养液(g·L-1):K2HPO41,NaH2PO41,(NH4)2SO410,MgSO4·7H2O 0.5,Ca(NO3)20.2, FeSO40.1,MnSO40.02,水1 000ml,pH7.2,121℃下灭菌30min。 1.2 仪器和方法 1.2.1 核磁共振波谱仪am-400,红外光谱仪;核磁共振波谱仪;光谱体,光谱能谱仪; 元素分析仪Vario EL(德国 Elementar),核磁共振波谱仪AM-300(德国 Bruker),红外光谱仪EQUINOX(德国Bruker)。 1.2.2 木材降解率和元素分析试验 木材粉碎后过60目筛,50℃烘至恒重。取一定量木屑装入培养皿中,121℃下灭菌1h,冷却后加入一定量无菌的无机盐营养液,使木屑充分湿润。接种活化24h的斜面种子,接种量为106个/g木屑,28℃恒温培养,每隔6d定时定量补充无机盐营养液,培养60d后取出培养物,用无菌水充分洗涤,滤纸过滤去除菌体后称量残余木屑重量,根据差值法计算出木材的降解率。 将降解前后的样品在80℃条件下烘干至恒重后,进行元素分析、红外扫描和固相核磁分析,比较降解前后样品结构变化。 其中,降解率和元素分析试验结果取各平行样的平均值。固相核磁和红外光谱取变化较为明显的样品图谱。 2 结果与讨论 2.1 木材腐蚀真菌对山杨材、桉木、白砂糖的降解 假单孢杆菌PKE117对巨尾桉、加拿大杨和长白落叶松三种木材的降解率分别为7.58%、17.15%和26.75%;对长白落叶松的降解率明显大于加拿大杨和巨尾桉。 池玉杰等用东北林区64种木材腐朽菌对红松和青杨2种木材进行了46d降解的实验,结果表明这64种菌对青杨的降解率为0.3%～52.2%,平均值为17.6%;对红松材降解率为0%～19.8%,平均值为6.8%。池玉杰在用6种木材白腐菌对山杨材的降解实验中发现,60d内降解率为18.0%～24.2%。Terhi K等人用93种木材腐朽真菌对挪威云杉(松科)进行的70d降解实验中,降解率为0.6%～22.7%。J.C. del R1′o等人用担子菌对蓝桉进行的56d降解实验中,降解率为4%～20%。J.C. del R1′o等人用16种真菌对蓝桉进行的40d降解实验中,降解率为0.1%～25.9%。 对比文献和本研究结果(见图1)可知,假单孢杆菌PKE117对松木的降解效果明显优于文献中所采用的木材腐朽菌,且对杨木和桉木的降解能力则略高于平均水平。 文献中除烘干温度、培养时间和样品大小外,基本步骤一致,都没有提供在不加菌种时样品受其他影响的失重率,故在比较时没有加入这个因素进行比较。但这仍是个粗略的比较。 考虑到长白落叶松和加拿大杨、巨尾桉在木质素和半纤维素成分上的差异,该菌种对三种木材降解率的不同可能是由于该菌种具有独特的降解半乳糖单元或者愈创木基丙烷结构的能力。桉木的降解率较低则可能是存在抑制该菌种生长的物质,或者缺乏可供该菌种利用的聚糖造成的。 2.2 分解前后木材结构分析 2.2.1 c=o与c-o 三种木材在降解前的C含量为48.54%～48.86%,差别很小,见表1(所列数据为两个平行样本的平均值)。这是由于木材在进行元素分析之前,为避免水分的影响,在80℃条件下烘干至恒重。据报道,在完全烘干的情况下,各种木材的C含量基本一致。 降解后,三种木材的C、H含