三仁汤及拆方对大鼠高脂血症模型血脂及代谢产物谱的影响.docxVIP

三仁汤及拆方对大鼠高脂血症模型血脂及代谢产物谱的影响 据研究，脂代谢紊乱不仅是主要的人类疾病因素，如动脉硬化、冠状动脉粥样硬化、脑卒中、糖尿病并发症和代谢综合征，以及其他身体系统的重要疾病。它是人类疾病的最大威胁。中医药作为治疗高脂血症的途径之一,对高脂血症的防治具有独特的作用和优势。因此,根据我国国情,充分发挥中西医结合的优势,采取综合措施,降低其导致动脉粥样硬化的危险性是我国心血管疾病研究的一个重要方面。本研究采用高脂饲料喂饲法复制大鼠高脂血症模型,选择调畅三焦气机的经典代表方剂三仁汤,并根据其组方原理、配伍及功效,将该方拆为上焦方、中焦方和下焦方,采用核磁共振(nuclear magnetic resonance, NMR)和生化分析技术,观察在三仁汤全方及不同拆方干预下高脂血症模型大鼠血脂和代谢产物谱的变化情况。 材料和方法 1 实验动物,4.9.做好研究,5.9.32%g 健康雄性SD大鼠70 只,SPF级,体重(196.25±9.92)g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。许可证编号:SCXK(京)2007-0001。饲养环境:温度22～25 ℃,湿度70%,自由饮水。 2 中药饮片制备 三仁汤(由苦杏仁15 g、 滑石18 g、 通草6 g、 竹叶6 g、 厚朴6 g、 生薏苡仁18 g、 半夏10 g、 白蔻仁6 g组成),上焦方(苦杏仁15 g),中焦方(由白蔻仁6 g、 半夏10 g、 厚朴6 g组成),下焦方(由生薏苡仁18 g、 滑石18 g、 通草6 g、 竹叶6 g组成),各味中药饮片由首都医科大学附属北京中医医院中药房提供。北京市中医研究所药化室制备水提取物浸膏,4 ℃保存备用。阳性对照药为阿托伐他汀钙(立普妥,20 mg/片,辉瑞制药有限公司,批号。 3 -三甲基硅烷基 重水(D2O)、氘代氯仿及氘代甲醇,均为美国Cambridge Isotope Laboratories, Inc.公司;3-三甲基硅烷基-2,2,3,3-四氘代丙酸钠(TSP),德国Merck公司。肝素钠,购自上海生物化学试剂商店;血脂试剂盒购自北京北化泰康临床试剂有限公司。试剂批号:甘油三酯(TG) 总胆固醇(TC) 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C) 低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C) 4 脉冲场梯度ftnmr 美国瓦里安公司(Varian,Inc.)INOVA 600 MHz超导核磁共振谱(superconducting fourier transform nuclear magnetic resonance,FT NMR)仪,配备脉冲场梯度,带梯度场的三共振探头;离心机:德国Eppendorf公司MiniSpin Plus个人微型高速离心机。ZS-3型半自动生化分析仪,北京中生公司。 5 高脂饲料的配制 实验动物普通饲料适应性喂养3天后,采用随机数字表法随机分为正常对照组(正常组)、模型组、三仁汤组、上焦方组、中焦方组、下焦方组及阿托伐他汀钙组(对照组),每组10只。正常组给予基础饲料;其余各组给予高脂饲料。饲料以每只30 g/d投放,实验期间自由饮水。 高脂饲料参照文献所述方法配制:胆固醇4%,猪油10%,丙基硫氧嘧啶0.2%,胆酸钠0.3%,基础饲料85.5%。由中国医学科学院实验动物研究所工作人员混匀后,压制成高脂饲料,进行饲喂。于造模开始时按成人等效剂量分别给4组(三仁汤组、上焦方组、中焦方组、下焦方组)大鼠灌胃;对照组给予阿托伐他汀钙(4.8 mg/kg);正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃。每天给药1次。 6 血液收集与制备 于造模后第3周取血,进行血脂及代谢组学检测及分析。用10%水合氯醛(0.3 mL/kg体重)腹腔麻醉大鼠后,经腹主动脉收集血液,一部分加入肝素钠抗凝管中,制备血浆用于代谢组学分析。采集的血浆于-80 ℃冰箱中保存备用。剩余部分离心(3 500 r/min,20 min),制备血清,用于检测血脂4项:TC、TG、LDL-C以及HDL-C。 7 血液测试 采用生化分析仪检测TC、TG、LDL-C及HDL-C。 8 代谢组的检测与分析 8.1 酸钠[2,2,3,3,3,3,3,3-o-trimethylusamesims,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3,3-trimethylus的合成 向编号后的EP管中分别依次加入100 μL(3-三甲基硅烷基)-2,2,3,3-四氘代丙酸钠[2, 2, 3, 3-D (4)-3-(trimethylsilyl)