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脉冲电磁场对大鼠骨密度和血清转化生长因子 由于社会老龄化和交通产业的发展，残余性骨瘦素（dop）的趋势显著增加。脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields, PEMF)已被广泛运用于临床上多种骨骼相关疾病的治疗,包括骨折延迟愈合、骨不连、新鲜骨折、先天性假关节等。目前细胞因子在DOP骨重建过程中的变化仍不清楚。本研究观察PEMF对DOP大鼠模型骨密度(bone mineral density, BMD)、骨组织学、血清转化生长因子β1(transforming growth factor-beta 1, TGF-β1)浓度等指标的影响,探讨PEMF对DOP的预防性治疗作用及可能的作用机制,旨在为临床应用提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 模型的建立及预防 取健康清洁级4月龄雌性SD大鼠80只,体质量230～260 g,由第三军医大学大坪医院野战外科研究所实验动物中心提供,动物许可证编号为SCXK(军)2002-008。实验开适始前应性饲养1周。按体质量随机区组法分为4组:正常对照组(INT组)、单纯模型组(DOP组)、降钙素组(CT组)、脉冲电磁场组(PEMF组)。INT组大鼠喂养DOP大鼠饲料消耗量的平均水平,后3组建立DOP大鼠模型。CT组和PEMF组术后即分别给予降钙素(2 IU/kg,腹腔注射,1 次/d)及PEMF照射(2 h/次,1 次/d)行预防性治疗。各组分别于建模后1、2、4、8周时取5只大鼠,进行骨密度、骨组织学和血清TGF-β1浓度等指标检测。实验取材时各组大鼠体质量无统计学差异(P0.05)。 1.2 大鼠饲料饲养 参考文献方法,结合本实验室的具体条件作一些改进,具体步骤:5%水合氯醛腹腔麻醉,大鼠右胫骨远端约1 cm处钻孔,直径0.6 mm医用钢丝穿过并折成三角形固定环。距肛门1.5 cm处尾部轻轻缠绕2圈1.5 cm宽医用胶布条,将胫骨穿孔钢丝在其外面松紧适当打结固定。术毕置于大鼠专用饲养笼,每笼5只,动物房通风良好、室温20～22 ℃、湿度60%～70%、12～12 h间隔照明,标准大鼠饲料喂养(钙、磷含量分别为0.51%和0.42%),自由饮水。每日检查制动有效性及钢丝穿孔处局部软组织情况,隔日碘伏消毒胫骨穿孔处。 1.3 信号发生器点 整个系统由信号发生器(江苏扬中科泰电子仪器有限公司,CA1640P-02型)和亥姆霍兹线圈两部分组成。信号发生器输出波形为脉冲方波,频率15 Hz,脉冲时间8 ms;亥姆霍兹线圈半径为20 cm,直径0.67 mm漆包铜线缠绕500圈。轴线中点附近场强经高斯计检测为8 Gs。 1.4 指标的观察和测试 1.4.1 一般观察 观察大鼠麻醉苏醒时间、进食、活动及制动局部有无感染等情况,每周测量大鼠体质量1次。 1.4.2 布包裹,冻藏 大鼠麻醉后迅速完整取出右下肢股骨,仔细剔除软组织,湿盐水纱布包裹,-20 ℃冻藏。待全部标本收齐后取出,室温下旷置1 h充分解冻,干纱布吸干标本表面的水分,用Norland-XR36双能X线骨密度仪(小动物软件)检测右侧股骨近端骨密度。 1.4.3 胫骨近段mri的观察 取大鼠右胫骨近段约1.5 cm,4%多聚甲醛固定48 h,10% EDTA 脱钙4周,石蜡包埋,6 μm切片,HE染色,光镜下观察。 1.4.4 性能检测方法 大鼠右心室穿刺取血,3 000 r/min离心后收集血清,-70 ℃低温冰箱保存待测。采用ELISA方法检测,试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司,并按照说明书进行操作。 统计学处理:计量资料以xˉ±sxˉ±s表示,采用SPSS13.0统计软件分析,同一时间点的组间比较采用随机单位组方差分析。 2 结果 2.1 一般情况下 实验大鼠均无意外死亡,右后肢制动大鼠麻醉苏醒后能以余下3足站立,自由活动和觅食,制动局部无感染、坏死等并发症。 2.2 骨小梁排列特征 建模后2周时DOP组制动侧胫骨近段病理切片镜下观察,见骨小梁稀少、中断,排列不整齐,区域性消失,而CT组骨小梁排列较DOP组明显紧密、有序(图1A、B)。从建模后4周起,PEMF组骨小梁较DOP模型组致密,8周时骨小梁排列较同时期CT组致密(图1C、D)。 2.3 各组骨密度对比 建模后1周时各组间制动侧股骨近端骨密度无明显差异(P0.05)。2周时DOP组骨密度较INT组明显降低(P0.01),而CT组骨密度明显高于DOP组(P0.05);从建模后4周起CT组和PEMF组骨密度均较DOP组明显增高(P0.05);8周时PEMF组骨密度明显高于CT组(P0.05,图2)。 2.4 nt组p0.05 DOP组大鼠血清TGF-β1浓度在建模后1周时明显高于INT组(P0.05),而后逐渐下降,从建模后4周起明显低于正常水平(P0