自然恢复和离心运动恢复对大鼠腓肠肌纤维横截面积及类型的影响.docxVIP

自然恢复和离心运动恢复对大鼠腓肠肌纤维横截面积及类型的影响 成熟的骨骼具有很强的可塑性，能够快速适应环境的变化和运动的能力。骨骼肌的适应性包括形态学、收缩特性和蛋白含量的变化。在生理或病理条件下,骨骼肌结构和功能的调整能应付环境和体力活动的变化。骨骼肌这种高度可塑性也可导致其机能障碍。如宇航员在太空飞行或病人卧床不起,以及运动员受伤停训等肢体制动情况下,去负荷导致的废用性萎缩会产生与肌肉功能相关的运动机能障碍,也会使肌纤维类型转化,主要使慢肌(I型)纤维向快肌纤维(II型)转变。 学者们尝试了不同方法改善去负荷骨骼肌的机能状态,如电刺激肌肉进行各种抗阻练习,或将动物放入离心吊舱内,通过旋转产生1.5G或2.6G的重力加速度,对抗肌萎缩或使萎缩肌肉尽快恢复。骨骼肌对不同形式运动负荷产生不同的机能与形态适应,如离心运动可动员更多神经肌肉活性,因此可能产生更好的恢复效果。上述研究只从电刺激离心收缩,或以重力加速度产生离心收缩的物理方法改善肌萎缩,本研究从运动训练学角度,采用废用性肌萎缩常用的尾部悬吊去负荷模型及自然恢复和离心运动两种再负荷方式,观察肌纤维横截面积及类型从正常到萎缩再到恢复的变化过程,为深入了解肌萎缩机理及探索恢复方法提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 实验动物及饲养条件 Sprague-Dawley雌性SD大鼠24只,SPF级,8周龄,体重180～210克。许可证号SCXK(京)2002-0001,动物编号0668277(北京维通利华实验动物技术有限公司)。标准饲料分笼饲养,自由饮食。室温(22±2)℃,相对湿度50%～70%,12小时光照交替(光照7:00～19:00;黑暗19:00～次晨7:00)。动物实验经由北京实验动物福利伦理委员会北京体育大学分会批准。 1.2 悬吊恢复组er 将24只大鼠按体重配对原则随机分为对照组(CON)、尾部悬吊组(TS)、悬吊14天后解悬吊自然恢复组(NR)和悬吊14天后解悬吊离心运动恢复组(ER),每组6只。 1.3 大鼠解悬吊及体系运动情况 采用废用性肌萎缩常用的去负荷尾部悬吊模型。TS、NR、ER组单笼(航天医学工程研究所特制)饲养,尾部悬吊,躯干与平地成25-30°角,前肢着地,动物可在笼内自由活动和饮食。悬吊时间为14天,每天早晚检查大鼠尾部及后肢毛色情况,查看悬吊尾部是否发生扭曲、淤血及脱落或后肢是否出现任何的支撑状况,并随大鼠体长生长情况定期调整尾部悬吊位置,以免后肢着地。在去负荷14天后取材解悬吊时,大鼠不能正常站立,后肢不能正常活动。 ER组大鼠解悬吊后,先进行1周缓冲适应期:安静休息3天,第4天适应性水平跑15 min,跑速为11 m/min;第5天下坡跑15 min,坡度为-5%,跑速为11 m/min;第6天下坡跑30 min,坡度-5%,跑速为11 m/min。第2周为低强度有氧离心运动期:每天晚上进行下坡跑,坡度-5%,跑速16 m/min,时间1 h。运动强度及训练方案参照Bedford的研究。 1.4 肌纤维分型染色 骨骼肌组织取材时间:CON和TS组在实验开始后第14天取材;NR和ER在实验开始后第28天取材,其中ER组在运动练习结束后至少休息24小时取材。 取材过程:大鼠称重后采用戊巴比妥钠腹腔麻醉(45 mg/kg),迅速取左侧腓肠肌称重。大鼠腓肠肌相对湿重为其湿重(mg)与体重(g)比。迅速轻柔剪取其肌腹组织约3 mm×3 mm×5 mm的样品进行OCT包埋,投入用液氮预冷的异戊烷(-70℃)速冻,之后用锡纸包好放入液氮中保存。用时-20℃恒冷切片机(LEICA CM 1850)切片,厚度8μm,干燥箱中晾干备用。 肌纤维分型染色方法:参考Ogilvie和Feeback以及王月丽、周越改良的异染性染料-腺苷三磷酸酶法鉴别肌纤维类型。其中预孵育液pH值为4.35,孵育液pH值为9.4。图片转换成黑白照片后能区分出3种肌纤维类型:黑色为I型纤维,灰色为IIb型纤维,灰白色为IIa型纤维。此法优点是可在一张切片上同时鉴别骨骼肌I型、IIa型、IIb型肌纤维,且不需连续切片。 1.5 肌纤维类型分型 利用Image-Pro Plus 6.0(Media Cybernetics)及ImageJ 1.42(National Institutes of Health,NIH)软件对图像进行肌纤维类型分型并计算横截面积。从每个切片中随机取10个视野、计数每个视野内Ⅰ型、Ⅱa型和Ⅱb型肌纤维数目,以每种类型肌纤维数与该视野内肌纤维总数之比为该类型纤维组成百分比。采用Image J软件计算肌纤维间质(AI)的积分光密度及Ⅰ、Ⅱ型肌纤维横截面积(CSA)。 收集的数据结果以平均值±标准差表示,用SPSS13.0统计软件进行独立样本t检验,P0.05为差异有统