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黄芩苷和黄芩素在大鼠胃肠吸收动力学研究 黄鼠狼的主要成分是黄鼠狼。它具有广泛的抗癌、抗炎、抗菌、抗癌、抗癌等药物特性。研究表明,黄芩苷是黄芩素的复原型前体药物,即:黄芩苷在肠内经过菌群作用转化为黄芩素而吸收,然后再于体内还原为黄芩苷。因此全面比较黄芩苷和黄芩素在各部位的吸收情况,了解它们在各肠段的吸收特征,对提高其口服生物利用度和开发口服制剂具有重要意义。 1 材料和方法 1.1 药品、试剂和仪器 HPLC仪器为Laballiance Series Ⅲ型等度系统:Series Ⅲ型泵、Model 500型UV-Vis检测器和7725i进样阀;HL-2型恒流蠕动泵(上海青浦沪西仪器厂)。 黄芩苷和黄芩素对照品由中国药品生物制品检定所提供,批号分别为110715-200212和111595-200301;黄芩苷提取物由成都福润德实业有限公司提供,批号为041015,≥90%(HPLC);黄芩素提取物由成都欧康植化科技有限公司提供,批号为041128,≥95%(HPLC)。甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。 Wistar大鼠,雄性,体重200 g左右(四川大学华西实验动物中心)。 1.2 黄鼠狼的吸收 1.2.1 进一步的浓度 人工胃液的配制:按《中国药典》2005年版二部附录配制含胃蛋白酶的人工胃液。 Krebs-Ringer试剂(pH 7.4,简称K-R试液)的配制:称取NaCl 7.8 g,KCl 0.35 g,CaCl20.37 g,NaHCO31.37 g,NaH2PO40.32 g,MgCl20.02 g,葡萄糖1.4 g,加水定容至1 000 mL,即得。 黄芩苷乙醇溶液的配制:精密称取黄芩苷提取物84.89 mg,用无水乙醇稀释定容至50 mL,即得。 黄芩素乙醇溶液的配制:精密称取黄芩素提取物80.1 mg,用无水乙醇稀释定容至50 mL,即得。 黄芩苷胃灌注液的配制:精密吸取上述黄芩苷乙醇溶液2 mL,再精密加入Tween 80 (10%)5 mL,用人工胃液稀释定容至100 mL,即得。 黄芩素胃灌注液的配制:精密吸取上述黄芩素乙醇溶液2 mL,再精密加入Tween 80 (10%) 5 mL,用人工胃液稀释定容至100 mL,即得。 黄芩苷肠灌注液的配制:精密称取黄芩苷提取物33.8 mg、酚红20.0 mg和维生素C 2.0 g,再精密加入无水乙醇20 mL及Tween 80 (10%) 10 mL,用K-R试液稀释定容至1 000 mL,即得。 黄芩素肠灌注液的配制:精密吸取上述黄芩素乙醇溶液20 mL,再精密加入Tween 80 (10%体积比) 10 mL、酚红20.0 mg及维生素C 2.0 g,用K-R试液稀释定容至1 000 mL,即得。 酚红液:精密称取酚红20.00 mg和维生素C 2.0 g,然后加入乙醇20 mL及Tween 80 (10%体积比) 10 mL,用水定容至1 000 mL,即得。 1.2.2 在体吸收实验中 1.2.2. 胃灌注液制备 选实验前禁食1夜(自由饮水),体重200 g左右的Wistar大鼠,腹腔注射戊巴比妥钠40 mg·kg-1,麻醉后固定。切开腹部,暴露胃,在贲门、幽门两处各切一小口,结扎贲门,用人工胃液将胃洗净。吸取胃灌注液4 mL并注射到胃内,结扎幽门。将胃放回腹腔,用红外灯保持体温37 ℃左右。胃灌注液中药物浓度为初始浓度。2 h后取出胃,将胃内药液转移置10 mL量瓶,用人工胃液少量多次地洗涤胃内部,洗液一并转入上述量瓶,最后用人工胃液定容,摇匀。此量瓶中药物浓度作为终浓度,根据药物初始药量和终末药量之差(初始浓度×初始体积-终浓度×终体积)与时间的比值计算其每小时吸收率。 1.2.2. 固结玻璃管制备 选实验前禁食1夜(自由饮水),体重200 g左右的Wistar大鼠,腹腔注射戊巴比妥钠(40 mg·kg-1),麻醉后固定。沿腹中线打开腹腔(约2.5 cm),于实验肠段两端各切一小口,在上端小口处插入直径为0.3 cm的玻璃管,并用线扎紧。用注射器将37 ℃的生理盐水缓缓注入肠管,洗去肠管内容物至净。然后在实验肠管下端小口处插入玻璃管,并用线扎紧。将肠管两端的玻璃管与蠕动泵的胶管连接,形成回路,开动蠕动泵。肠灌注液以5 mL·min-1流速循环10 min后,将流速调节为2.5 mL·min-1,立即自灌注液锥形瓶中取样1 mL,同时向锥形瓶中补加酚红液1 mL,其后每隔15 min亦按同法取样并补加酚红液,循环2 h后,中止实验。样品10 000 r·min-1离心5 min,取上清液20 μL用HPLC法同时测定黄芩苷、黄芩素和酚红的浓度,根据Fick方程原理对药物浓度改变进行拟合,求药物的吸收参数。 2 保肝作用大鼠肠道吸收引物