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木豆叶对卵巢切除大鼠血管内皮细胞功能的影响 近年来，许多临床数据和实验研究表明，患有骨质疏松症的患者具有明显的血瘀迹象。血瘀的存在与骨质疏松症的发生和发展密切相关。木豆叶为豆科植物木豆的干燥叶及嫩枝,长期临床运用发现豆叶具有“活血化瘀,补肾健骨,消肿止痛”的功效。本实验拟从活血化瘀角度探讨木豆叶对去势大鼠血管内皮细胞功能的调节作用,选取血瘀证相关因子血浆内皮素(endothelin, ET), 血清一氧化氮(nitric oxide, NO) 作为考查指标。 1 材料和方法 1.1 大学实验动物中心饲养 SPF级3月龄SD大鼠(180~220) g60只,由广州中医药大学实验动物中心提供并饲养,动物合格证号:0031640,实验室合格证号:0022890。按体重随机分为6组:假手术组、模型组、龙牡壮骨颗粒组、木豆叶高剂组、木豆叶中剂组、木豆叶低剂组,每组10只。 1.2 清卵,除卵巢 假手术组:即行双侧卵巢摘除术相同的手术过程,但不摘除卵巢;其余各组动物予20%乌来糖麻醉,腹部切口摘除双侧卵巢,按压止血,4号线缝合,碘酊及75%酒精消毒, 皮下注射青霉素 105U/只。 1.3 龙牡蛎壮骨颗粒、no试剂盒 木豆叶水提物(以下简称木豆叶)(产品批号:080329)由广州中医药大学新药中心提供,实验时以蒸镏水配成所需浓度;龙牡壮骨颗粒,武汉健民药业生产,产品批号:0802149;青霉素,购于广州中医药大学附属第一临床医院。NO试剂盒(批号,南京建成生物工程研究所生产;ET试剂盒(批号:080530)由北京普尔伟业生物科技有限公司提供。CV-600电热恒温水箱,离心机,振荡器,UV-2100紫外分光光度计。 1.4 实验分组和药物 术后3 d开始每日给药,假手术组和模型组:20 mL/kg生理盐水灌胃;龙牡壮骨颗粒组:给服龙牡壮骨颗粒4 g/kg,龙牡壮骨颗粒是传统的用于强筋健骨药,成份:党参,黄芪,麦冬,龟甲(醋制),白术(炒),山药,五味子(醋制),龙骨,牡蛎(煅),茯苓,大枣,甘草,乳酸钙,鸡内金(炒),维生素D2,葡萄糖酸钙,辅料为蔗糖,通过健脾益胃促进骨钙吸收,实验采用7岁以上儿童临床用药量的8倍,与木豆叶高剂组临床用药量倍数相同;木豆叶高剂组:按8 g/kg给服木豆叶;木豆叶中剂组:4 g/kg给服木豆叶;木豆叶低剂组:2 g/kg给服木豆叶。每天灌胃1次,持续给药8 w。 1.5 血清生化指标检测 眼周静脉取血2 mL,注入含7.5%EDTA二钠30 μL和抑肽酶20 μL的试管中,4 ℃ 3000 r/min离心,10 min,-20℃保存,送广州中医药大学核医学实验室检测。上海日环仪器TSN-695B型放免γ测量仪,北京普尔伟业生科技有限公司ET试剂盒(批号:080530),本实验r=0.998,批内CV=1.36%。同时,眼周静脉取血0.5 mL,常温3000 r/min离心10 min后移取血清以测NO。NO 严格按照说明书(硝酸还原酶法)操作进行检测。 1.6 统计处理 所有结果进行t检验,以(xˉ±s)(xˉ±s)表示。 2 各组大鼠血浆et 全部大鼠经造模手术,抗炎处理,无死亡。3 d后伤口基本愈合,术后1 w可见动物烦躁,情绪变化明显,倦怠懒动,食量减少;术后4 w骨密度检测见骨量丢失趋势明显。每日给药持续8 w,于第9 w眼周静脉丛一次性采血2.5 mL,碘酊及75%酒精消毒后无动物死亡。因所购NO试剂盒为50管,故每组随机取8个标本作检测。 各组大鼠血浆ET,NO含量见表1。由表1可知:①模型组ET(170.39±12.71)与假手术组ET(141.04±15.75)比较升高明显(P0.01);模型组NO(19.70±6.19)与假手术组NO(38.14±3.51)比较显著降低(P0.01)。②龙牡壮骨组,木豆叶高、中、低剂组与模型组比较ET降低(P0.01),NO升高(P0.01或P0.05)。③木豆叶高剂组NO(42.80±11.06)含量高于龙牡壮骨组NO(32.42±8.42)比较(P0.05),木豆叶高剂组ET(129.93±14.13)含量与龙牡壮骨组ET(146.57±18.58)比较差异不显著,龙牡壮骨组ET平均值、NO平均值介于木豆叶中剂组与木豆叶低剂组之间。④木豆叶高、中、低剂组比较结果,高剂组与中剂组两项指标均无差异;高剂组与低剂组ET差异明显(P0.01),NO比较有统计学意义(P0.05)。 3 讨论 3.1 木豆叶在治疗pmop中的作用 临床研究表明:绝经后骨质疏松症(PMOP)患者存在血瘀征象,且与血瘀证微观分子生物学的改变关系密切。PMOP主要是因绝经后妇女卵巢功能低下,雌激素显著减少,骨耦联过程失衡,破骨细胞的骨吸收作用超过了成骨细胞的骨形成作