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一测多评法在中药多成分同步质量控制中的应用 中药多成分、多作用的特点是，单一成分难以证明中药的品质。多成分同步质量控制模式是建立并迅速普及的。另一方面，高参考水平和多指标质量控制的实际应用受到限制。那么, 能否找到一种方法既能实现多成分的质量控制, 又能克服对照品紧缺和检测成本高的困难呢? 本着“发挥科研为标准服务, 标准为生产实际服务”的指导思想, 考虑到中药有效成分多为类群、类群间存在某些内在关系的特性, 发挥科研工作者拥有大量单体成分 (对照品) 的优势, 探索同类成分间的相关关系, 在严格的方法学和交叉验证的基础上, 使未来的质量标准在只测定某个代表性成分 (易得、廉价、有效) , 同时可计算出其它待测有效成分的含量, 使其计算值与实测值符合定量方法学的要求。我们把这种质量控制方法称为“一测多评”法 (quantitative analysis of multi-components by singlemarker, QAMS) 。该方法得到了《中国药典》2010年版一部的收录, 为进一步规范QAMS的方法学考察、方法学验证等内容, 制定本技术指南。 1 范围 本方法适用于对照品难得或制备成本高或不稳定的情况下同类多成分同时测定。 2 相对校正因子及待测成分浓度的计算 在一定的线性范围, 成分的量 (质量或浓度) 与检测器响应成正比。在多指标 (s, a, b, …, i, …) 质量评价时, 以药材 (或成药) 中某一典型有效成分作内参物 (s) , 建立内参物与其它待测成分 (a, b, …, i, …) 间的相对校正因子 (RCF, fsa, fsb, fsc, …) , 按下式计算: 式中As为内参物对照品s峰面积, Cs为内参物对照品s浓度, Ai为某待测成分对照品i峰面积;Ci为某待测成分对照品i浓度。 在方法学建立时, 主要是求出内参物与各待测成分间的RCF, 并把它作为一个常数用于含量测定中[药典附录VI D3 (3) ]。 在测定含量时, 内参物 (s) 的浓度可按常规方法进行测定 (Cs) (药典附录ⅥD) ;应用RCF (fsa, fsb, fsc, …) , 结合内参物 (s) 实测值Cs, 计算待测成分 (a, b, …, i, …) 的浓度, 见公式2。 式中Ai为供试品中待测成分i的峰面积, Ci为供试品中待测成分i的浓度, As为供试品中内参物s的峰面积, Cs为供试品中内参物s的浓度, fsi为内参物s对待测成分i的校正因子。 3 重要内容和技术要求 3.1 测试指标的选择 3.1.1 对照品的确定 原则上应选择药材中药理作用比较明确的有效成分或与药材临床功效具有相关性的指标性成分;作内参物的对照品 (s) 应是相对易得者;其他检测指标 (a, b, …, i, …) 应是不易得到或制备难度大或成本高或不稳定者。 3.1.2 质控指标验证 在3.1中选择的待测成分, 有时可能只是文献数据, 能否作为QAMS质控指标, 需进行实际验证。因此, 在确定了多成分同时测定的色谱条件后, 应对收集的样品进行初步分析, 重点关注分析条件和各拟测成分峰面积范围等信息。 3.1.3 测量对象的成分含量 3.2 样品的标准规范 选择有代表性药材作为研究样本, 样本数应满足统计学的相关要求, 原则上拟建立质量标准的药材样品不低于40批。药材应包括主产地、道地产区、GAP基地的药材和饮片样本。 3.3 必要时体制 实验中所用的自制对照品需经严格的纯度检查, 纯度应大于98%, 必要时注明含量, 供校正用。 配制内参物对照品溶液:分别取各待测成分对照品 (s, a, b, …, i, …) 一定量, 精密称定, 采用适宜的溶剂, 制成含适宜浓度的混合溶液, 用于RCF的计算。 3.4 hplc分析条件的确定 参照 (药典附录ⅥD) 的要求, 完成色谱条件的优化。 3.5 方法研究 3.5.1 同时测定不同的组件 参照药典附录ⅩⅧA的要求完成准确度、精密度、专属性、定量限、检测限、线性、范围、耐用性等各项内容的考察, 应符合要求。 3.5.2 rcf影响因素的确定 QAMS法的重点在于测定各待测成分 (s, a, b, …, i, …) 间的RCF, 并对其耐用性进行系统考察。 利用对照品溶液和确定的分析条件, 建立内参物 (s) 与待测成分 (a, b, …, i, …) 之间的RCF (fsa, fsb, fsi, …) 。 待测成分RCF耐用性系指在测定条件有小的变动时, RCF对影响的承受程度。为使所建立的各待测成分的RCF能用于常规检验, 应对待测成分RCF耐用性进行全面的考察, 如果测试条件要求苛刻, 则应加以限定。考察内容包括:RCF在各种条件 (流动相的组成比例、p H值、柱温、流速及检测波长