污灌农田土壤中有机污染物的组成成分及其脂质过氧化作用.docxVIP

污灌农田土壤中有机污染物的组成成分及其脂质过氧化作用 根据《中国环境状况公报》2006年，中国地表水的总水质为中度污染。国家环境监测网实际监测的745个地表水监测断面中,劣Ⅴ类水质的断面所占比例为28%;一些原本清洁的河流变成了纳污渠,由于我国总体水资源不足,灌溉用水不断被工业和城市生活用水所挤占,农业生产缺水情况日趋严重,流域范围内农田被迫使用污水灌溉。目前,我国利用污水灌溉的农田面积为361.84万km2,占我国总灌溉面积的7.3%,占地表水灌溉面积的10%。因此,污水灌溉引起的环境污染问题已不容忽视。目前关于污水灌溉卫生问题的研究主要集中于对灌溉用水和土壤中重金属污染的研究,而对土壤有机物污染问题及其有机污染物的联合毒性研究甚少。在现行的GB 15618—1995《土壤环境质量标准》中,缺少特定有机污染物的卫生标准,更没有反映有机污染物综合毒性的指标。这给土壤和农产品有机污染物的监督和监测带来极大不便,故急需制订相关标准。笔者于2006年5月采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)对某污灌区和对照区土壤中的有机污染物进行分析,并对反映脂质过氧化水平的3项重要指标:总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)含量进行测定,为客观评价污灌土壤中有机物的污染状况及其联合毒性积累资料,为修订和完善土壤质量标准提供科学依据。 1 材料和方法 1.1 质谱联用仪 KQ-500VDB型超声振荡器(昆山超声仪器厂);K-D浓缩器;6890型气相色谱-5973N型质谱联用仪(美国Aglient公司)。T-SOD活力、GSH-Px活力、MDA含量试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。丙酮、石油醚、环己烷均为分析纯(天津化学试剂厂);硅胶经活化后,使用前用5%蒸馏水脱活;无水硫酸钠使用前经650℃灼烧。 1.2 样品的采集和处理 1.2.1 离污灌溉生长 于2006年5月,选取某污灌区农田的土壤作为研究对象,灌溉水水质为劣Ⅴ类;选取远离污灌区、采用地下水(水质符合GB5749—2006《生活饮用水卫生标准》)灌溉农田的土壤作为对照。按HJ/T 166—2004《土壤环境监测技术规范》,采用梅花形布点采集样品,采集距表层0~20 cm的土样,采样量为1~2 kg。 1.2.2 提取有机物 1.2.2. 1样品前处理 将采集的土壤样品自然干燥,用木棒碾压,通过2 mm尼龙筛,用玛瑙研钵将其研磨至全部通过40目尼龙筛。 1.2.2. 提取沉淀3% 准确称取样品30.00 g,加入丙酮-石油醚-环己烷混合液(体积比为1∶1∶1)60 ml,放置过夜。次日用超声振荡提取30 min,离心,收集上清液,将沉淀再用提取液(丙酮-石油醚-环己烷混合液)提取2次。收集3次提取液,置于K-D浓缩器中,于70℃水浴减压浓缩至1 ml。 1.2.2. k-d浓缩法 取玻璃层析柱,下端塞入适量玻璃纤维,从上端装入4 g脱活硅胶,再加入4 g无水硫酸钠,用10 ml环己烷淋洗层析柱以除去有机杂质。将浓缩后的提取液倒入玻璃层析柱,用20倍体积的环己烷进行连续洗脱,收集洗脱液,将洗脱液再次用K-D浓缩器于70℃水浴减压浓缩至2 ml后,标号,冷藏,备用。其中1 ml用于成分分析,剩余部分浓缩至干,用二甲亚砜溶解,备用。 1.3 worm分析条件和方法 1.3.1 初始温度与速率升温 载气为高纯氦气,恒压模式为19.7 psi(1 psi=6 894.76 Pa);柱温程序:初始温度为40℃,保持1 min后,以12℃/min的速率升温到200℃,再以3℃/min的速率升温到260℃,保持3 min;进样量为1μl。 1.3.2 色谱-质谱条件 离子源温度为150℃;四级杆温度为230℃;色谱-质谱接口温度为280℃;离子化方程式为EI;电子能量为70 e V;调节方式为自动调节。 1.3.3 分析 采用标样保留时间结合GC-MS谱库检索法对有机物进行定性分析,采用标准曲线法进行定量分析。 1.4 小鼠的土壤重金属污染试验 选择清洁级昆明小鼠40只,体重为15~20 g,雌雄各半,由华北煤炭医学院实验动物中心提供,许可证号为SCXK(豫)2005-0001。将小鼠随机分为溶剂对照组(用二甲亚砜染毒)、对照区低剂量组、对照区高剂量组、污灌区低剂量组、污灌区高剂量组。高、低剂量组染毒剂量分别为25、5 g土壤干重/(kg·d)。采用灌胃法染毒,1次/d,连续染毒2周。染毒14 d后,处死动物取血,1 500 r/min离心10 min(离心半径为15 cm),分离血清,备用。 1.5 指标测定 血清中T-SOD活力、GSH-Px活力、MDA含量按试剂盒说明书的方法进行测定。 1.6 数据统计与分析 采用Excel 2003软件建立数据