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双价转基因棉上棉蚜种群结构分析 20世纪70年代，自动驾驶实验室首次将bt-内毒素基因转移到烟台后，bt-内毒素基因的烟台、番茄、马蹄、棉花和玉米在国内外相继报告。1996年转Bt基因玉米、棉花、西红柿在美国开始种植推广,1998年转Bt基因棉花在中国河北、山东、河南等地也开始大面积种植。除单价转基因棉外,导入Bt基因和胰蛋白酶抑制剂基因的双价转基因棉也展现出了广阔的应用前景。无庸置疑,转基因作物在减少化学农药用量、保护生态环境和提高控制害虫危害方面发挥了巨大作用,但转基因作物安全性如何?对人类、有益生物、非靶标有害生物等是否存在生态风险?随着转基因作物推广面积的迅速扩大,特别是在“斑蝶事件”后,这一问题越来越为研究人员所关注。 然而,迄今人们对转基因棉的研究还主要集中在靶标害虫棉铃虫等鳞翅目害虫上,关于转基因棉对棉田内非靶标重要害虫是否有影响报道甚少。Sims认为转基因棉对螨类无不良影响;Wilson等则认为转基因棉由于对鳞翅目害虫的抗性减轻了棉叶的受害,间接促进了甘薯白粉虱的种群增长;崔金杰等发现,转基因棉田内棉蚜、红蜘蛛、棉盲蝽、白粉虱、棉叶蝉等刺吸式口器害虫有加重发生的趋势,认为其主要原因可能是转基因棉减轻了鳞翅目害虫种群的危害,同时又由于鳞翅目害虫减少使棉田天敌特别是寄生性天敌数量下降,造成刺吸类害虫上升。由于上述研究结论均来自于大田调查,难以说明转基因作物本身对非靶标害虫的直接影响。鉴此,本研究将以棉田刺吸类害虫的典型代表棉蚜为试验对象,在室内条件下用转Bt基因单价棉、转Bt与豇豆胰蛋白酶抑制剂(cowpea trypsin inhibitor,CpTI)基因的双价棉连续多代饲养,以探明转基因棉对棉蚜种群增长能力的影响,为评估转基因棉对刺吸类非靶标害虫的生态风险提供依据。 1 材料和方法 1.1 保铃棉32b “国抗22号”:双价转基因棉(导入Bt和CpTI双基因,由江苏省农业科学院农业生物遗传生理研究所提供);“保铃棉32B”:单价转基因棉(导入Bt基因,从孟山都公司购买);常规棉“泗棉3号”(双价转基因棉的亲本,从泗阳棉花原种场购买)。 1.2 棉专业大学生的增殖率测定 除第1代和第2代棉蚜在室内变温条件(20~25℃)下外,其余各代棉蚜均在室内恒温恒光条件(27±1℃,L∶D=14∶10)下,分别用上述3个品种1叶1心期的棉苗饲养。试验前每株棉苗接5头左右成蚜,待在同一天产足5头以上仔蚜时,剔除成蚜,每苗留5~10头仔蚜,并记数作为起始蚜量,此后每天检查棉蚜存活数和产仔数,同时剔除所产仔蚜。在产仔高峰时将成蚜挑至另1株无虫苗上,经1 d产仔后再将成蚜转移至原来苗上,所产仔蚜作为下一代的起始虫量,数量仍保持5~10头。如此进行蚜虫的继代饲养,获得不同世代。每世代不同棉株处理重复10次,以保证各处理实测蚜虫数量均在50头以上。 利用生命表数据计算棉蚜的净增殖率R0=Σlxmx;平均寿命T=Σ(xlxmx)/Σ(lxmx);内禀增长率rm=lnR0/T,其中lx为棉蚜在x时间的存活率,mx为棉蚜在x时间的每雌产仔量。 1.3 主张浸泡与执行 收集第14代不同棉花品种上生长的棉蚜成虫,浸泡于70%酒精中。每个棉花品种收集30头以上,在解剖镜下用测微尺测量蚜虫头宽、体宽、体长和腹管长。 2 结果 2.1 改变棉根对棉蚜虫种群增长的影响 2.1.1 棉专业患者棉/认识较少对转棉仿真的影响 由表1可见,在棉蚜17代的连续饲养中调查了第1代,第4至第5代、第7至第12代以及第17代共10个代次的净增殖率,仅第11代双价转基因棉国抗22上棉蚜净增殖率显著低于常规棉泗棉3号,而单价转基因棉保铃棉32B上棉蚜净增殖率与泗棉3号无显著差异,其余各代次,转基因棉上棉蚜净增殖率与泗棉3号上的均无显著差异。第1代棉蚜净增殖率远远高于其余各代(表1),主要是由于第1代棉蚜是在相对较低的室内自然变温条件(20~25℃)下饲养的,以后各代则在27℃恒温条件下饲养,前者更适于棉蚜的生长。所以无论单价转基因棉还是双价转基因棉都未稳定地表现出对棉蚜净增殖率有利或不利的影响。 同一横行中不同小写字母者表示差异达0.05显著水平。 Figures followed with different small letters in the same line mean significantly different at 0.05 level. 2.1.2 双价考核原理 转基因棉和常规棉上的棉蚜内禀增长率的差异不同于净增殖率:第8代棉蚜单价转基因棉保铃棉32B上的蚜虫内禀增长率极显著高于常规棉泗棉3号(P0.01),双价转基因棉国抗22号上的蚜虫内禀增长率与常规棉泗棉3号无差异(表2),而此代次两个转基因棉上棉蚜的净增殖率与常规棉均无明显差异(表1);第1