植物生物技术4_实验二：愈伤组织的诱导及形态观察-华中农业大学课件.pdfVIP

实验二愈伤组织的诱导及形态观察 一、实验目的 掌握植物体细胞胚胎发生的理论，了解植物愈伤组织诱导，分化的形态学、细胞学特征。 二、原理 植物体是一个结构复杂的多细胞系统。这些高度分化的不同组织及组成组织的不同细胞构 成了植物体，并以高度的协调方式在发挥作用。而植物细胞具有全能性(totipotency),也就 是说，植物体细胞或性细胞，在人为控制的培养条件下都具有再生成新个体的潜能，因而 在适宜的条件下可以被诱导生长分化形成完整植株。植物愈伤组织(callus)诱导就使那些已分 化的体细胞包括离体的器官、组织和细胞在人工培养基上，经多次细胞分裂而失去原来的分 化状态，形成无结构的愈伤组织或细胞团的过程。这种使已分化的体细胞回复到未分化的原 程的实质是解除分化，逆转细胞的分化状态，使其回到分化前的原始状态，以恢复细胞的 全能性。然而，离体培养的植物组织和细胞形成的处于脱分化状态的愈伤组织，仍可以再度 分化成另一种几种类型的细胞、组织、器官，甚至最终再生成完整的植株。这一过程称作再分 化(redifferentiation),简称为分化(differentiation)。 愈伤组织的概念是指将植物上的某个部分切下，形成外植体，接种到适宜的培养基上 培养，其外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁组织。植物外植体如根、 茎、叶、幼穗和幼胚等，当将它与母体分离及培养在含有适宜浓度吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸 就可能转变为一种能迅速增殖的细胞团，即愈伤组织。 根据外植体来源不同，愈伤组织可以发生自形成层，皮层，髓，次生韧皮部及木质部 薄壁组织和表皮等。离体培养下外植体的细胞，在各种因素作用下，进行脱分化而产生增殖 的组织团块并进一步发展成为不受亲本外植体影响的典型愈伤组织。然而，来自不同植物外 植体的愈伤组织，其质地和物理性状差异很大。有的很紧密坚实，有的很疏松脆弱或呈胶质 状；有的呈淡黄色，有的呈白色或淡绿色等。愈伤组织在长期的培养中能够形成分生组织区、 管胞和色素细胞，或者形成体细胞胚。这种能够形成体细胞胚的愈伤组织叫做胚性愈伤组织 (embryogenic callus)。 三、实验材料 棉花品种YZ1,以及由YZ1下胚轴诱导的胚性愈伤组织。 四、器具和试剂 超净工作台，显微镜，载玻片，天平，三角瓶，封口膜，镊子，酒精灯，培养皿，滤 纸，剪刀，琼脂，pH试纸，MS培养基母液(见表一),2,4-D,KT(激动素),葡萄糖 五、实验步骤与说明 选取培养一周的无菌苗的下胚轴，用解剖刀切成0.5～0.6cm小段，接种于诱导培养基 上配方如下： 法参见实验一) 每瓶接种7-9个茎段，平行放置，28℃光照培养，每天14小时光照。每个星期观察愈伤的 生长情况，三个星期后统计愈伤诱导率(愈伤数/接种下胚轴数),以及愈伤组织的颜色，大 小，质地；比较下胚轴上部和下部诱导愈伤能力。 分别挑取少量非胚性愈伤和胚性愈伤组织，置于载玻片上，滴几滴清水用镊子捣碎愈 伤组织，观察比较两者细胞学特征。 注意事项： 在切无菌苗时，一定要使用锋利的刀片，尽量做到一刀能切断，避免挤压茎段。 无菌苗培养时间不宜过长(培养七天最好)。 六、实验结果与思考题 描述胚性愈伤和非胚性愈伤组织形态学和细胞学特征? 愈伤组织的诱导经历哪几个时期，每个时期各有那些特点? 愈伤组织的形态发生有那些途径，各有什么特点?