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即时浸酸对家蚕卵h 谷胱甘醇是细胞中最重要的小分子氧化物质。还原型（gsh）与氧化型（gssg）的差异反映了细胞的氧化状况（lu，2009）。高GSH/GSSG说明细胞处于还原状态, 而低GSH/GSSG说明细胞处于过氧化状态 (Asensiet al., 1999) 。GSH由谷氨酰半胱氨酸连接酶 (glutamate cysteine ligase, GCL) 和谷胱甘肽合酶 (glutathione synthase, GS) 依次催化合成, 其中GCL是限速酶。通常谷胱甘肽在细胞内不能被降解, 但谷胱甘肽S-转移酶 (glutathione S-transferase, GST) 可以催化GSH与亲核物质结合形成复合物, 在起到解毒作用的同时, 也造成总谷胱甘肽 (GSH+2GSSG) 含量的减少 (Singhet al., 2001;Vontaset al., 2001;Hayeset al., 2005) 。一方面, GSH在谷胱甘肽过氧化物酶 (glutathione peroxidase, GPx) 的催化下被H2O2氧化为GSSG; 另一方面, GSSG在谷胱甘肽还原酶 (glutathione reductase, GR) 催化下被NADPH还原为GSH。就昆虫细胞而言, 分别由硫氧还蛋白过氧化物酶 (thioredoxin peroxidase, TPx) 和硫氧还蛋白还原酶 (thioredoxin reductase, TrxR) 代替GPx和GR, 负责GSH的氧化和GSSG的还原 (Kanzoket al., 2001) 。另外, GST也可以象GPx一样催化GSH氧化为GSSG (Formanet al., 2009) 。 鉴于滞育 (diapause) 与蚕种生产密切相关, 长期以来研究者对家蚕Bombyx mori滞育现象进行了深入研究, 其研究成果不仅加深了对昆虫滞育调控机制的认识, 而且有力地促进了蚕种生产技术的进步 (Yamashita, 1996;徐卫华, 1999;黄君霆, 2003) 。滞育性家蚕卵大约在产下后24 h左右开始滞育发动, 表现为呼吸耗氧量急剧下降、 糖原大量转化为山梨醇和胚胎细胞分裂放慢并且最终在72 h左右完全停止于细胞周期的G2阶段。此后, 家蚕卵就进入滞育状态, 在室温下可以维持滞育状态约300 d, 直到因为水分散失导致家蚕卵溃瘪死亡。只有经历长期的低温处理, 家蚕卵的滞育状态才能被解除。不过, 在滞育发动阶段, 进行盐酸处理, 可以有效阻止滞育发动的进行, 使滞育性家蚕卵象非滞育性家蚕卵一样, 在大约两周时间内孵化。这种处理称为即时浸酸, 已经在蚕种生产中得到广泛应用 (冯家新, 2004) 。与长期低温处理一样, 即时浸酸可以促进家蚕滞育生物钟蛋白 (time interval measuring enzyme, TIME) 与抑制肽 (peptidyl inhibitory needle, PIN) 复合物分离, 导致TIME的ATPase活性爆发 (Kaiet al., 2008) 。尽管体外试验表明, TIME具有ATPase、 酯酶 (esterase A4, EA4) 和超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase, SOD) 等活性, 但是其在家蚕卵内的天然底物和其在滞育调控中的具体功能都还不清楚。因此, 即时浸酸阻止家蚕卵滞育发动的机制仍然需要进一步探讨。 近年来, 我们对H2O2与家蚕滞育调控的关系进行了研究, 发现即时浸酸通过抑制滞育家蚕卵过氧化氢酶 (catalase, CAT) 基因的转录, 造成家蚕卵内H2O2水平显著升高; 适当的外源H2O2处理, 同样可以有效阻止家蚕卵滞育发动 (Zhaoet al., 1999;赵林川等, 2000;沈爱英等, 2003;韩武梅等, 2009) 。此外, 滞育发动阶段, 家蚕卵NAD+含量显著下降, 而NADP+含量显著上升, 即时浸酸可以阻止上述变化 (赵林川和时连根, 2008) , 该结果能够较好地解释滞育发动过程中家蚕卵呼吸耗氧量急剧下降和糖原转化为山梨醇并且大量积累下来等现象。本研究以滞育家蚕卵为对照, 调查了即时浸酸对滞育家蚕卵中总谷胱甘肽含量、 GSH含量、 GSSG含量及GST活性的影响。 1 材料和方法 1.1 家蚕品种 二化性、 单系家蚕原种丰一 (Feng 1) , 由浙江省蚕种公司提供。 1.2 即时浸酸家蚕卵和非浸酸家蚕卵处理 温度25±1℃、 连续光照下催青, 孵化后常规桑叶育, 幼虫期、 蛹期和成虫期都置于25±1℃、 光周期12L∶12D中, 以制备滞育性家蚕卵。滞育性家蚕卵 (约30 g) 产下后保护于25±1℃、 光周期12L∶12D中,