无酚棉籽粕的提取及预消化处理研究.docxVIP

无酚棉籽粕的提取及预消化处理研究 这些籽含有大量蛋白质，不仅是重要的植物饲料，也是世界上最重要的植物种类。棉籽粕中的蛋白质由良好的氨基酸组成, 是氨基酸组成较齐全的优质高蛋白质饲料, 蛋氨酸与胱氨酸含量高于大豆, 并且与大豆一样具有很高的氨基酸利用率。棉籽中的棉酚及其衍生物对人和动物有毒害, 主要是棉酚与某些酶及蛋白质结合, 破坏了酶的活性及蛋白质的可消化性, 阻碍了正常代谢。低酚棉籽中蛋白质含量和赖氨酸利用率比普通有酚棉籽高。 我国是世界上最大的棉籽生产国, 有巨大的植物蛋白质资源宝库, 但榨油后约有80%棉籽粕被当作肥料直接下地, 造成巨大的蛋白质资源浪费。因此, 对棉籽蛋白质开发利用将是一项重要战略措施, 通过对棉籽粕中蛋白质的研究, 为大规模的工业生产提供了理论基础, 棉籽蛋白作为高蛋白食品、高质量广谱饲料及医药工业原料等方面有很大的潜力与应用前景。 1 材料和方法 1.1 试剂、仪器和仪器 棉籽粕 (河北省机榨棉籽粕饼) ;中性蛋白酶;2709-PRE碱性蛋白酶 (无锡市酶制剂厂) ;田氏指示剂;甲基红指示剂;甲基橙指示剂;1 mol HAcMAc缓冲液, p H约5.4;1%茚三硐-乙二醇甲醚色液 (G/H) ;Folin试剂。 日立-835-50型氨基酸自动分析仪;721分光光度计;LD4-2型医用离心机。 1.2 蛋白的提取和碱提 称取10 g棉籽粕, 加入150 m L蒸馏水后用30%氢氧化钠调p H至7.5, 浸泡8 h后过滤, 滤液用浓盐酸调p H至4.2, 大量沉淀析出, 加入150 m L无水乙醇, 离心分离得到蛋白沉淀, 无水乙醇洗涤2次, 无水乙醚洗涤1次, 干燥, 称得蛋白的质量为1.18 g。 向水提后的残渣中加入0.1%氢氧化钠150 m L, 调p H至10~11, 搅拌浸泡2 h后过滤, 滤液用浓盐酸调p H至4.2, 其余步骤同水提, 然后再重复碱提1次。第1次碱提蛋白为浅褐色, 1.39 g;第2次碱提后蛋白为褐色, 0.3 g。 1.3 氨基酸浓度测定 1) 100℃下短时处理:称取10 g棉籽粕, 加入1%醋酸20 m L, 在干燥箱中恒温100℃处理1 h, 然后提取蛋白, 称得水提蛋白为0.38 g, 碱提蛋白为0.61 g;以蒸馏水为空白对照, 通过茚三酮显色法利用721分光光度计在λ=570 nm处测定吸光度计算氨基酸质量浓度。 2) 常温下长时处理:向4份2.5 g棉籽粕中各加入5 m L蒸馏水, 0.1%、0.5%和1%的醋酸溶液常温下处理24 h后, 加蒸馏水25 m L, 离心过滤得上清液, 茚三酮显色法测定吸光度。 1.4 蛋白、碱提蛋白 1) 中性酶处理:称取10 g棉籽粕, 加入0.5%中性酶溶液20 m L, 调节p H至7, 37℃恒温槽中水解4 h, 提取蛋白, 称得水提蛋白1.13 g, 碱提蛋白1.46 g。 2) 碱性酶 (2709-PRE) 处理无酚棉籽和有酚棉籽:称取有酚棉籽粕和无酚棉籽粕各2份, 每份2 g, 各加入20 m L蒸馏水, 用10%氢氧化钠调节p H至9, 然后均加入0.05 g 2709-PRE, 搅拌后放入38℃恒温槽中温恒22 h, 离心, 上清液过滤后取2 m L滤液稀释至50 m L容量瓶中, 用Folin-酚试剂法测蛋白质质量浓度, 采用纸上层析法分离并分析氨基酸。 1.5 氨基酸质量浓度测定 1) 预处理时间的选择:取10支离心管, 各加入2 g脱酚棉籽饼和20 m L蒸馏水, 用10%氢氧化钠调节p H至9, 在其中5管中加入0.05 g 2709-PRE, 然后将所有离心管放在38℃恒温槽中恒温, 每4 h为一时间间隔, 最长为20 h, 采用Folin-酚法和茚三硐显色法测定氨基酸质量浓度。 2) 用水量的确定:称取5份2 g的无酚棉籽饼, 编号1、2、3、4和5, 分别加入20、15、10、5和4 m L蒸馏水, 用10%氢氧化钠调p H至9, 然后各加入0.05 g 2709-PRE, 在38℃恒温槽中恒温20 h, 然后按顺序分别加入0、5、10、15和16 m L蒸馏水, 搅拌离心取上清液稀释200倍后测定OD值。 2 结果与讨论 2.1 棉籽粕蛋白的应用 通过原氏提取法测棉籽粕的粗脂肪含量为8.2%, 粗纤维含量为22%, 蛋白质含量为43.8%, 蛋白质提取率为65.6%, 产率为28.7%。此棉籽粕饼为机榨饼, 其中粗脂肪和粗纤维量十分接近, 蛋白质的提取率及产率均较高, 较普通机榨饼高近1倍, 说明试验选用的棉籽粕质量较高, 很适合于棉籽粕蛋白的开发利用。 从表1可见:棉籽粕蛋白中的氨基酸含量均较高, 尤其是氨基酸中的必需氨基酸远高于一般要求 (35%) 。因此, 试验用棉籽饼粕蛋白是一种