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--egcg单体的制备工艺研究 不包括未经处理的坚果茶素[（eg）]。从绿茶中提取出来的生物活性成分具有低毒性。具有抗逆性、降血脂、降胆固醇、抗癌、抗癌、抗菌、细菌和病毒等生理药理活性。可广泛应用于食品、药物、精细化工等领域。 (-)-EGCG的提纯分离方法主要有sephadex LX-20柱层分离,高效液相色谱法的制备分离和高速逆流色谱分离等。 这些提取分离方法工艺流程长、提取过程中使用氯仿或重金属等有毒物质,设备投资高,分离材料昂贵,限制了其在食品、粮油、医药等领域的广泛应用。 本文采用聚酰胺柱层分离法制备高纯度的(-)-EGCG,与所报道的提取纯化工艺相比较具有工艺简单、所用溶剂无毒无污染、安全、价廉、溶剂和聚酰胺可重复循环使用等优点,适合工业化生产。 1 实验部分 1.1 gan-n-o-rapod元素分析方法 Waters 600型高效液相色谱仪(HPLC)(美国);BRUKER(500 MHz)核磁共振仪(德国),D2O作溶剂;FINNIGAN 液-质联用仪(美国);UV-1601型紫外分光光度仪(日本);VECTOR-22型红外光谱仪(德国);WZZ-2S数字式旋光仪;ALPHAI-6型冷冻干燥机(德国);CHN-O-Rapid元素分析仪(德国)。 玻璃层析柱规格1 200 mm×40 mm;聚酰胺粒径0.170～0.210 mm;甲醇(色谱纯);乙酸乙酯(分析纯);乙醇(工业品),绿茶(安徽滁州市施集茶厂);实验用水为蒸馏水。 1.2 绿茶中--ecgg标准线性方程的制备 取(-)-EGCG标准样用HPLC法测定浓度-峰面积标准线性方程如下: Y=5 586 243.3X-125 577.5 式中,Y为峰面积(μV·s);X为(-)-EGCG的质量浓度(mg/L);方程的线性相关系数为1.00;色谱条件:以V(CH3OH)∶V(H2O)=3∶7的混合溶剂为流动相,检测波长为275 nm,流速为1 mL/min。 参考文献方法,称取1.0 g/份的经粉碎过孔径为0.960 mm筛的绿茶粉末3份 ,置于3个圆底烧瓶中。 分别加入体积分数为50%的乙醇溶液10 mL,在水浴中恒温50 ℃回流提取2 h,过滤。 滤饼再按以上步骤重复提取2次。 合并滤液,定容至50 mL容量瓶中作为供试品液。 用HPLC法测定峰面积,根据标准样的浓度-峰面积标准线性方程计算绿茶中(-)-EGCG的质量分数(ω)为8.0%。 在后续醇提和脱色工艺研究中,每次取提取液或脱色液总体积的1/5,分别加入体积分数为50%的乙醇,定容至50 mL容量瓶中作为供试品液;在聚酰胺柱层分离工艺研究中,每次取洗脱液80 mL,分别加入体积分数为50%的乙醇,定容至100 mL容量瓶中作为供试品液。 用HPLC法测定各供试品液的峰面积,根据标准样的浓度-峰面积标准线性方程计算供试品液中(-)-EGCG的质量分数(ω′),按下式计算(-)-EGCG的提取率: (-)-EGCG的提取率(%)=ω′ω×100%(%)=ω′ω×100% 1.3 重复使用的回收 将50 g聚酰胺置于600 mL乙醇中加热回流2 h,过滤,滤饼用蒸馏水洗3次,滤液中的乙醇回收重复使用。 再向聚酰胺中加入300 mL蒸馏水浸泡过夜。 用脱脂棉塞住层析柱底部,将蒸馏水浸泡处理好的备用聚酰胺细粉除去气泡后,倒入层析柱中,使聚酰胺自然沉降,放出柱内多余的蒸馏水,至水面略高于聚酰胺粉表面时关闭活塞,待用。 1.4 茶多酚的提取和测定 称取10 g绿茶,粉碎过孔径为0.960 mm筛,用乙醇液热提,抽滤,滤液经旋转蒸发回收乙醇,得比重为1.03的浓缩液,加入3.6 g活性炭脱色。用乙酸乙酯萃取,萃取液经旋转蒸发回收乙酸乙酯,得茶多酚粗品。 加适量蒸馏水溶解,配成质量分数为25%的水溶液加入到聚酰胺柱上。 先用蒸馏水洗脱,流速为2.5 mL/min,至收集液由黄色变成无色为止。 换体积分数为50%的乙醇水溶液洗脱,流速为4.0 mL/min,按每份50 mL收集,HPLC检测至洗脱完全。 将含(-)-EGCG的流份合并,回收乙醇,浓缩液经冷冻干燥后,得0.4 g (-)-EGCG的类白色粉末,提取率50%,HPLC测得(-)-EGCG含量为99%。 2 结果与讨论 2.1 产品结构的性能 2.1.1 旋转光的测量 在与文献相同的条件下,测定提取物的旋光度,结果与文献值完全一致,[α]D=-148.0(c=1.0,THF)。 2.1.2 吸收峰和峰数 提取物水溶液紫外光谱上的最大吸收波长为275 nm,与文献报道的(-)-EGCG的紫外吸收峰273.4 nm一致。 提取物的红外光谱在1 692 cm-1处有1组较强的νC—O伸缩振动吸收峰,在1 190～1 240 cm-1处有1组较强的νC—O—C