重组DNA技术的基本工具课件高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptxVIP

第3章 基因工程重组DNA技术的基本工具科技探索之路基因工程：是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物制品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫 重组DNA技术1.操作环境体外环境2.原理基因重组3.操作对象基因4.操作水平分子水平5.结果赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物制品6.意义定向改造生物性状；克服远缘杂交不亲和障碍科技探索之路例1. 人的胰岛素基因能通过拼接并在受体细胞大肠杆菌中表达出相同蛋白质——胰岛素的理论基础是？（1）大肠杆菌和人的遗传物质都是 。（2）不同生物的DNA分子能够拼接在一起，原因是 。 （3）同一种基因在不同生物体内表达出来的蛋白质相同，因为 。（4）遗传信息的传递都遵循 。DNA基因的组成、空间结构和碱基互补配对方式相同所有生物共用一整套遗传密码中心法则 到社会中去那么，科学家究竟用到了哪些“分子工具”？这些“分子工具”各具有什么特征呢？限制性内切核酸酶：分子手术刀准确切割DNA分子DNA连接酶：工具分子缝合针将DNA片段连接起来载体：分子运输车将体外重组好的DNA分子导入受体细胞磷酸二酯键一.重组DNA技术的基本工具1. 限制酶来源: 从微生物(主要是原核生物)体内分离出来功能: 能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。切点切割部位：磷酸二酯键 （消耗水）EcoRⅠ识别的序列切点切点切点（大部分限制酶切割结果为黏性末端）一.重组DNA技术的基本工具1. 限制酶切割结果：黏性末端和平末端在中轴线处切割，形成平末端在中轴线两侧切割，形成黏性末端EcoR Ⅰ如：EcoRI限制酶能识别GAATTC序列，为6个核苷酸，并在G和A之间切开。中轴线黏性末端限制酶能切开RNA分子的磷酸二酯键吗？限制酶切一次可断开几个磷酸二酯键？产生多少游离的磷酸基团？产生几个黏性末端？消耗几分子水？在中轴线两侧切割，形成黏性末端形成的黏性末端（从5’往3’读）为________一个限制酶切割一次断两个磷酸二酯键形成___个黏性末端，消耗________ 分子水。 同一种限制酶切割形成的黏性末端________两个黏性末端有___个游离的磷酸基团AATT22黏性末端相同两中轴线如：Sma I限制酶能识别CCCGGG序列，为6个核苷酸，并在G和C之间切开。平末端在中轴线处切割，形成平末端一.重组DNA技术的基本工具1. 限制酶【思考1】① 限制酶存在于原核生物中的作用是什么?原核生物容易受到外源DNA的入侵限制酶的作用:切割外源DNA,使之失效保证自身的安全②限制酶为什么不会剪切原核生物本身的DNA?DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列, 或者DNA分子被修饰（甲基化），使限制酶不能将其切开一.重组DNA技术的基本工具请在两张纸上分别写上下面两段DNA序列，找到两条片段上EcoRI的识别序列和切割位点：一.重组DNA技术的基本工具1. 请在两张纸上分别写上下面两段DNA序列，找到两条片段上EcoRI的识别序列和切割位点：AATTCCGTAG AATTCCGTAG AATTCCGTAG CTTCATG AATTCCCTAA CTTCATG AATTCCCTAA 乙片段乙片段GGCATCTTAAGGCATCTTAAGGCATCTTAA GAAGTACTTAA GGGATT GAAGTACTTAA GGGATT 目的基因完整的DNA分子？使用DNA连接酶连接完整DNA分子2. DNA连接酶(1) 作用: 将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，形成重组DNA分子。(2) 分类：种类E·coli DNA连接酶T4 DNA连接酶来源功能特性相同点大肠杆菌T4噬菌体连接的黏性末端和平末端（但效率对较低）只能连接黏性末端恢复的都是磷酸二酯键一.重组DNA技术的基本工具2. DNA连接酶 旁栏思考（P72）：DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？DNA连接酶DNA聚合酶相同点作用实质化学本质不同点模板作用对象 作用结果 用途都能催化形成磷酸二酯键都是蛋白质 需要不需要只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键形成完整的重组DNA分子形成DNA的一条链基因工程DNA复制一.重组DNA技术的基本工具大肠杆菌及质粒结构模式图3. 基因进入受体