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夜间低温对薄皮甜瓜果实糖代谢的影响 0 低温胁迫对薄皮甜瓜品质的影响 [研究意义]薄皮瓜已成为中国北方设施园艺行业的重要植物种类之一。然而,设施秋冬茬薄皮甜瓜生产中常出现因果实膨大期低温胁迫而导致果实膨大速度慢和糖度下降的现象,严重影响了秋冬茬设施薄皮甜瓜的产量和品质,制约了这一茬次甜瓜生产的发展。因此,研究探讨低温胁迫影响设施薄皮甜瓜果实膨大和糖度的内在因子,对于提高秋冬茬设施薄皮甜瓜的产量和品质具有重要意义。【前人研究进展】有关低温胁迫影响果实蔗糖代谢的研究已有一些报道,并且已证实,以蔗糖为主要光合运转糖的植物果实中,蔗糖代谢的变化是影响果实膨大和品质的重要因子之一。对于以水苏糖作为主要运转糖的植物来说,有关水苏糖代谢与低温抗性关系的研究也有一些报道,忍冬茎尖中棉籽糖和水苏糖的积累与其抗冷性密切相关;矮牵牛随叶片中棉籽糖含量的增加冷适应性增强;紫花苜蓿在冷锻炼过程中,根和冠层中可以积累蔗糖、水苏糖和棉籽糖。【本研究切入点】但这些研究报道未能说明果实内水苏糖代谢对低温胁迫的响应以及与糖积累的关系,尤其是低温胁迫对薄皮甜瓜果实水苏糖和蔗糖代谢方面的研究还鲜见报道。【拟解决的关键问题】本文研究夜间低温对设施薄皮甜瓜果实各种糖含量及水苏糖和蔗糖代谢相关酶活性的影响,目的是为进一步探讨低温胁迫下薄皮甜瓜果实膨大和糖积累的机理及其调控技术提供依据。 1 材料和方法 1.1 夜间低温处理 试验于2007年7-10月在沈阳农业大学园艺科研基地日光温室内进行。供试薄皮甜瓜(Cucumis melo L.)品种为‘玉美人’,2007年7月10日播种,8月12日分苗至25 cm×25 cm(高×直径)的塑料桶中,定量浇水,单干整枝,21节位去生长点,12~14节位留瓜,1株留1个瓜。开花后7 d移入人工气候室进行夜间低温处理,处理温度分别为9、12、15℃(对照),处理时间为18:00-次日6:00,白天均升温为26℃,相对湿度和光照条件各处理相同。相对湿度60%;光照6:00-10:00为(475±50)μmol·m-2·s-1、10:00-16:00为(1045±50)μmol·m-2·s-1、16:00-18:00为(570±50)μmol·m-2·s-1、18:00-次日6:00无光照;共处理18 d,每处理25株。分别在夜间低温处理后0、3、6、9、12、15和18 d取各处理薄皮甜瓜中果肉6 g,用于糖含量的测定,取中果肉1 g,用于糖代谢相关酶活性的测定。单株取样为1次重复,共3次重复。 1.2 测量设计和方法 1.2.1 高效液相色谱法测定糖苷的含量 取样后称质量→置入试管→80%乙醇提取→80℃水浴1 h,反复提取3次,合并提取液,过C18小柱滤除色素,蒸干,1 ml超纯水溶解,上清液经0.45μm滤膜过滤后进液相(HPLC)测定,测定方法及色谱条件为:Waters 600E高效液相色谱,Dikma公司氨基柱,柱温35℃,2410示差检测器,流动相比例为70%乙腈﹕30%超纯水,流速为1.0 ml·min-1。标样为果糖(F)、葡萄糖(G)、蔗糖(Su)、棉籽糖(R)、肌醇半乳糖苷(G)、水苏糖(S),其中棉子糖、水苏糖、肌醇半乳糖苷均购自Sigmar公司,保留时间分别为7.0、7.5、9.1、14.5、15.9、21.1 min。其分离色谱图如图1所示,并用Waters Millennium软件控制及数据处理。 本试验中的总糖含量指的是以上几种糖的总和。 1.2.2 测定了淀粉含量 1.2.3 生化活性测定 (1)酶的提取:参照王永章等的方法,取冷冻的样品,加少量石英砂和10 ml Hepes缓冲液(50 mmol·L-1Hepes-Na OH,p H 7.5,1 mmol·L-1EDTA,10 mmol·L-1Mg Cl2,2.5mmol·L-1DTT,10 mmol·L-1Vc和5%Pvpp),冰浴研磨成匀浆,4层纱布过滤,12 000×g(4℃)离心20 min,弃沉淀,加硫酸铵,12 000×g(4℃)离心30 min,弃上清液,用提取缓冲液2~5 ml溶解沉淀,再用稀释10倍的提取缓冲液(不含Pvpp)透析20 h。以上所有操作均在0~4℃进行。(2)AI、NI活性测定:0.8 ml反应液(p H 4.8或p H 7.2的0.1 mol·L-1Na2HPO4,0.1 mol·L-1柠檬酸钠,0.1 mol·L-1蔗糖)中加入0.2 ml酶液,37℃条件下反应30 min,用3,5-二硝基水杨酸法测定生成的还原糖含量,酶的活性单位为μmol Glucose·h-1·g-1FW表示。(3)SS、SPS活性测定:参照於新建的方法,酶的活性单位为μmol Sucrose·h-1·g-1FW。本试验中测定的SS活性为合成方