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血液中乙醇测定结果不确定度的评估 如何提高和保证药物分析的质量是大多数色谱工作者面临的共同问题。目前,国内已有毒物分析实验室通过了国家实验室认可或计量认证。而国家实验室认可委员会自2004年始已将测量不确定度作为检测实验室通过认可评审的要求之一。因此,测量不确定度的评定在毒物分析工作中也必将会受到越来越多的重视。 中华人民共和国计量技术规范JJF1059-1999给出的测量不确定度的定义是:表征合理地赋予被测量之值的分散性,与测量结果相联系的参数。“合理”意指应考虑到各种因素对测量的影响所做的修正,特别是测量应处于统计控制的状态下;“赋予被测量之值”意指被测量的测量结果,它不是固有的,而是人们赋予的最佳估计值;“分散性”意指该估计值的分散区间或分散程度,而被测量之值分布的大部分可望含于此区间内;“相联系”意指测量不确定度是一个与测量结果“在一起”的参数,在测量结果的完整表示中应包括测量不确定度,此参数可以是诸如标准(偏)差或其倍数,或说明了置信水准的区间的半宽度。为了表征这种分散性,测量不确定度用标准(偏)差表示。在实际使用中,往往希望知道测量结果的置信区间,因此规定测量不确定度也可用标准(偏)差的倍数或说明了置信水准的区间的半宽度表示。为了区分这两种不同的表示方法,分别称它们为标准不确定度和扩展不确定度。 在科技工作中,测量结果如何可用不确定度来说明。不确定度越小,测量结果对真值越接近;不确定度越大,测量结果对真值越远离。因此,不确定度可以说明检测的水平。在血液中乙醇质量浓度测定工作中,由于使用的分析设备、测量环境、检测方法、检测人员及被检血样的影响,会产生一定的误差,形成测量结果的不确定度。本文使用顶空气相色谱法测定血液样本中乙醇质量浓度,从测定程序分析测量不确定度的来源,计算出血液中乙醇测定结果的相对合成标准不确定度和扩展不确定度。 1.1 试剂和溶液的制备 乙醇(99.5%,Chem Service),叔丁醇(99.4%,Chem Service)。 1.1.2 叔丁醇储备液的制备 乙醇对照品溶液:精密称取乙醇1.0097 g于100 mL容量瓶中,添加重蒸馏水至刻度,混匀,得10.00mg/mL乙醇储备溶液。用重蒸馏水稀释成1.00 mg/mL乙醇使用液。 叔丁醇内标溶液:精密称取叔丁醇0.5026g于100 mL容量瓶中,添加重蒸馏水至刻度,混匀,得5.00mg/mL叔丁醇储备液;用重蒸馏水稀释成4.00×10-2mg/mL叔丁醇内标使用液。 1.2.1 柱温和设备一个“概述”,钢柱温2. 色谱柱:5%CARBOWAX 20M/Carbopack(80-120目)2m×2mm玻璃柱; 柱温:程序升温。始温70℃,升温速率5℃/min,至100℃,保持0.5min,再以40℃/min升温至150℃,保持1.2min; 检测器:火焰离子化检测器(FID); 进样口温度:150℃; 载气(N2):柱压51.9psi; 1.2.2 标准曲线的建立 配1mL定量进样环。加热箱温度65℃;传输线温度80℃;气相循环时间8.5min;样品瓶加热平衡时间10.0min;样品瓶加压时间0.10min;定量环充满时间0.05min;进样时间1.00min。 取空白全血配制成含乙醇质量浓度为0.30,0.50,0.70,1.0,1.5 mg/mL的系列样品,各取0.10mL加入样品瓶内,分别添加0.50 mL叔丁醇内标使用液,密封,混匀,置于顶空自动进样器中或65℃水浴中加热10 min,进样测定,建立校准曲线的回归方程。1.4检材血样测定 取检材血样0.10 mL 2份于样品瓶内,分别添加0.50 mL叔丁醇内标使用液,密封,混匀,置于顶空自动进样器中,加热10 min,进样测定,两份血样测定结果的相对相差应≤5%。1.5计算测量不确定度 确定测量不确定度来源并计算各不确定度分量,计算合成标准不确定度及扩展不确定度。 2 乙醇峰面积与内标峰面积比值y 校准曲线的回归方程为:Y=b X+a。式中Y为乙醇峰面积与内标峰面积比值(As/Ai),X为质量浓度值(ρ/mg·m L-1),a为截距,b为斜率。血液中乙醇质量浓度为:。 2.2 测量的价值 检材血样2次平行测定乙醇质量浓度值分别为1.007和0.993mg/mL,平均值为1.00mg/mL。 2.5 b类不确定度 不确定度分量可分为A类和B类。A类不确定度分量是由统计确定的标准不确定度分量,以平均值的实验标准偏差表征。B类不确定度分量是用非统计方法确定的标准不确定度分量。 测定结果标准偏差: 测定平均值的相对标准不确定度: 当n=2时,公式(3)可改写为: 测定平均值的相对标准不确定度则为: 2.5.2 b类不确定度 2.5.2. 不确定度评定方法 配制对照品溶液所用对照品的纯度、