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sz诱导的糖尿病大鼠模型稳定性研究 糖尿病（m）是由遗传和环境因素引起的一过性临床综合征，主要表现为糖代谢异常，主要表现为慢性高血糖。近年来随着我国经济水平快速增长、人民生活水平日益提高,DM作为一种代谢性疾病已经成为威胁我国人民身体健康的常见的慢性疾病之一。但是有关其发病原因及发病机制目前仍有很多情况尚不十分清楚,因此,通过建立稳定可靠的DM动物模型以期对该病进行更深入的研究就显得极为重要了。目前建立DM动物模型方法较多,如通过手术切除胰腺、使用STZ或者四氧嘧啶诱发、病毒诱导以及自发性转基因动物模型等,其中以注射STZ建立DM动物模型的方法应用最为广泛,但由于其确定的建模成功的标准目前尚未完全统一,许多研究对此也是报道不一。因此,为了进一步增加该药物诱导的T1DM动物模型的稳定性和可靠性,从2011年4~8月对STZ诱导的T1DM大鼠模型建模成功的标准进行了摸索,就建模成功的标准提出了一些新的建议。 1 材料和方法 1.1 动物、模型、仪器 健康清洁级SD大鼠,合格证号:scxk(黔)2002-0001,由贵阳医学院动物中心提供,雄性,体重180~220 g;血糖仪及血糖试纸(美国雅培公司);STZ(美国Sigma公司)。 1.2 空腹血糖检测总体水平检测大鼠空腹血糖值 30只SD大鼠适应性饲养1周后,检测空腹血糖在3.0~5.0 mmol/L者入选。分组:将30只大鼠随机分为两组:对照组10只,T1DM组20只。给药:T1DM组腹腔注射由p H4.2、0.1 mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液溶解的STZ(按50 mg/kg的剂量[2~5])溶液1 ml,对照组腹腔注射1 ml p H4.2、0.1 mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。检测:分别在腹腔注射后72 h、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周检测各组大鼠的空腹血糖值。 腹腔注射STZ后,对每只大鼠空腹血糖进行监测,采用目前常用的腹腔注射STZ 72 h后空腹血糖值≥16.7 mmol/L即表示建模成功的标准,将模型组又划分为建模成功组及建模失败组,并统计出在不同时间段各组的空腹血糖值,同时分别统计出在不同时间段的建模成功率。 1.3 统计分析 数据按均数±标准差表示,均数间比较采用t检验,采用SPSS 13.0统计软件进行统计分析,以P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 各组大鼠连续8周的空腹血糖值及不同时间段的建模成功百分率。见表1。 3 模型模拟成功标准 自1960年开始利用STZ诱发动物DM模型以来,STZ已经成为目前广泛采用的DM动物模型化学诱导剂。一般认为,一次性大剂量(50~90mg/kg)的STZ腹腔或静脉注射可直接破坏胰岛β细胞导致T1DM的发生,其具有简便、用药量小、药物毒性较低、胰岛β细胞损伤特异性高等诸多优点。但是,通过这种方法复制出的DM动物模型的稳定性如何,即在采用腹腔注射STZ 72 h后测定其空腹血糖值≥16.7 mmol/L的标准确定为DM后其空腹血糖值是否能始终保持在高水平状态,却是报道不一。本研究通过在腹腔注射STZ后,从72 h开始测定对照组及模型组空腹血糖,每周1次,连续8周后发现,按前述的建模成功标准,在开始阶段其成功率是随着时间的推移呈逐渐下降趋势的,通过表1可以发现在腹腔注射STZ后72 h时其成功率为100%,而到第3周时已经降至70%了,原因是其中有一部分大鼠空腹血糖值出现了反复,且通过长期观察最后证实这一部分大鼠空腹血糖值恢复到了正常水平。同时可以观察到虽然在第3周之前,建模失败组大鼠的空腹血糖值与相同时间段对照组大鼠的空腹血糖值相比较差异均具有统计学意义(P0.05),但从第4周开始就不再具有统计学差异了,所以最终的结果显示造模失败。我国宋立江等的研究以及余传林等的研究均报道过类似情况,即造模后血糖均值的变化趋势,呈现先逐渐升高,后逐渐下降趋势,其机制前者可能是大剂量的STZ在短时间内使胰岛β细胞大量破坏,胰岛素分泌显著下降致血糖迅速升高,从而引起DM,后者则可能是由于其自身抗体并未呈现明显变化,同时胰岛中β细胞的损伤激活了胰腺导管中的干细胞,其主导管、中导管、小导管上皮细胞的增殖指数均于β细胞损伤后第48 h达到最高峰,共同导管上皮细胞则于第72 h达到最高峰,进而增殖分化成为胰岛细胞,随着时间的推移,故而血糖逐渐下降。通过表1还可以发现,在3周以后所有符合建模成功标准的大鼠的空腹血糖值基本趋于稳定,且长期维持在较高的水平,与相同时间段对照组大鼠的空腹血糖值相比较均具有统计学差异(P0.01),表明这部分大鼠已经被成功地复制成T1DM模型了。 本研究的结果提示,在腹腔注射STZ后,需测定大鼠空腹血糖连续3周以上,且连续3周(最少3周)其空腹血糖值≥16.7 mmol/L才能判断复制T1DM大鼠