常用分子生物学技术的原理及应用784.pptVIP

第一轮筛选 第二轮筛选 第三轮筛选 基因组文库筛选结果举例 本文档共52页；当前第30页；编辑于星期三\4点31分 疾病相关基因的克隆与鉴定Cloning and Identification of Disease Relative Genes 第 五 节 本文档共52页；当前第31页；编辑于星期三\4点31分 克隆疾病相关基因的策略 （一）功能性克隆(functional cloning) （二）定位克隆(positional cloning) （三）非定位候选基因克隆策略(position- independent candidate gene approaches) （四）定位候选基因克隆策略(positional candidate gene approaches ) 本文档共52页；当前第32页；编辑于星期三\4点31分 定义 从对一种致病基因的功能的了解出发，克隆该致病基因。 （一）功能性克隆 应用 生化机制已明确、基因表达产物较易得到部分纯化的遗传性疾病。 本文档共52页；当前第33页；编辑于星期三\4点31分 克隆方式 ① 利用特异性抗体筛选表达型cDNA文库； ② 根据已知的部分氨基酸序列合成寡核苷酸作探针，筛选cDNA文库。 功能互补试验 (functional complementation assay) 利用酵母系统从功能学角度鉴定致病基因。 本文档共52页；当前第34页；编辑于星期三\4点31分 （二）定位克隆 定义 从一种致病基因的染色体定位出发逐步缩小范围，最后克隆该基因。 系统的定位克隆工作 ① 遗传学分析(确定致病基因染色体定位) 交换分析、连锁不平衡分析 ② 分子生物学分析 染色体异常(缺失、易位等)分析、基因文库的筛选与基因克隆 本文档共52页；当前第35页；编辑于星期三\4点31分 （三）非定位候选基因克隆策略 由于基因组作图的完成和分子病理学的发展，人们可以不依靠染色体定位，直接根据病理学变化和对各种基因产物功能的了解，预测出候选致病基因。 本文档共52页；当前第36页；编辑于星期三\4点31分 （四）定位候选基因克隆策略 当致病基因的染色体定位确认后，人们可以利用因特网上的基因网站所提供基因序列数据，鉴定出候选致病基因。 本文档共52页；当前第37页；编辑于星期三\4点31分 目 录 目 录 第二十二章 常用分子生物学技术的原理及应用 The Popular Technology in Molecular Biology: Principle and Application 本文档共52页；当前第1页；编辑于星期三\4点31分 第 一 节分子杂交与印迹技术Molecular Hybridization Blotting Technology 本文档共52页；当前第2页；编辑于星期三\4点31分 核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization ) 在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形成杂化双链(heteroduplex) 。 一、分子杂交与印迹技术的原理 本文档共52页；当前第3页；编辑于星期三\4点31分 复性 RNA DNA 本文档共52页；当前第4页；编辑于星期三\4点31分 （一）印迹技术 （二）探针技术 探针 (probe) 一小段用同位素、生物素或荧光染料标标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸，与固定在NC膜上的核苷酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。 本文档共52页；当前第5页；编辑于星期三\4点31分 二、印迹技术的类别及应用 （一）DNA印迹技术 (Southern blotting) 用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。 （二）RNA印迹技术 (Northern blotting) 用于RNA的定性定量分析。 （三）蛋白质的印迹分析 (Western blotting) 用于蛋白质定性定量及相互作用研究。 本文档共52页；当前第6页；编辑于星期三\4点31分 其他 斑点印迹 (dot blotting) 原位杂交 (in situ hybridization) DNA点阵 (DNA array) DNA芯片技术 (DNA chip) 本文档共52页；当前第7页；编辑于星期三\4点31分 三种印迹技术的比较