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中国石龙子精子形成的超微结构观察 精子发生和形成是一个复杂的生理过程。这一过程的研究是繁殖生物学和发育生物学的重要组成部分。特别是对于爬行动物,因处于特殊的进化地位,在从水生过渡到陆生以至于更高水平的脊椎动物的过程中,其精子在形成过程中所出现的不同结构及其微妙变化,无疑会包含系统发生信息,这些信息可为确定动物的分类地位、演化和亲缘关系提供相关依据。 对爬行动物精子发生和形成过程已有了较多的研究,几乎涉及爬行类的各大类群[6,7,8,9,10,11,12,13],但内容相对分散,特别是对科水平的研究,缺乏系统性,尚需作进一步的研究积累。 石龙子科(Scincidae)蜥蜴共有1 000余种,广泛分布于热带和温带地区。到目前为止,只报道了该科两个种的精子形成过程。中国石龙子(Eumeces chinensis)隶属石龙子科(Scincidae)、石龙子属(Eumeces),主要分布在中国南部(包括台湾、海南)和越南,是华东和华南许多地区蜥蜴区系的重要组成成分,对其精子形成过程的研究未见有相关的报道。本文对中国石龙子精子形成过程进行超微结构观察,旨在探讨中国石龙子精子形成的规律,为爬行动物有鳞类精子形成和系统发生的研究提供新的资料。 1 极低水势,进行切片分离和渗透,制备实生动物,并将其作为重塑家庭的动物样品,其得到高温水分、磷酸缓冲液、酸双固液和酸缓冲液体系中的催化剂. 研究用中国石龙子采自浙江丽水三岩寺,系雄性成体(体长 ≥ 100 mm)。分别于2003年3月中旬、3月底及4月中旬,每次2条～3条,断头处死动物后,迅速剖取精巢,切成1 mm3左右的小块,分别用 0.1 mol /L、磷酸缓冲液(pH=7.4)配制的2.5 %戊二醛(体积比)和1 %锇酸双固定,酒精系列脱水,618环氧树脂渗透并包埋,瑞典LKB2088超薄切片机切片,醋酸铀和柠檬酸铅双重染色,日立H-600透射电镜观察并拍照。 2 结果 2.1 糖体、滑面内质网及核旁甲基复合材料proacroomalvesiphe 精子形成始于早期精细胞,这种细胞有圆形或多角形的核,位于细胞中央,核含细的颗粒状染色质,胞质中有高尔基复合体、游离的核糖体、滑面内质网及大量的线粒体。核旁高尔基复合体较为规则。随着分化的进行,其成熟面分泌大量的小囊泡,这些小囊泡逐渐融合形成一个大而电子透明的、无顶体颗粒的前顶体囊泡(proacrosomal vesicle)(图版Ⅰ-1)。前顶体囊泡向核移动,并逐渐增大(图版Ⅰ-2)。中国石龙子精子形成的接下来过程,可根据Butler对蜥蜴类精子形成的过程划分成四个时期。 2.2 凹陷内部的染色 当前顶体囊泡移至核膜时,接触部位的核膜迅速向内凹陷,与此同时,前顶体囊泡内的颗粒物质开始相互融合形成一顶体颗粒(acrosomal granule),前顶体囊泡也就成为顶体囊泡(acrosomal vesicle),位于核稍有凹陷一侧的胞质中(图版Ⅰ-3、图版Ⅰ-4)。一薄层含颗粒的胞质将顶体囊泡与核膜分开,在这间隙里,顶体下颗粒(subacrosomal granule)将顶体颗粒和核膜连接起来,在连接处,核膜形成一个轻微的凹陷,颗粒物质变得轻微的电子致密(图版Ⅰ-5)。与顶体囊泡相连的那部分核膜比其它地方更紧密和电子致密。随着顶体囊泡逐渐增大,核继续向内凹陷,直至深入到核直径的约三分之一处停止,凹陷部分呈半圆形(图版Ⅰ-4)。在此期,染色质仍呈颗粒状,弥散在细胞核内。 在精细胞分化的早期,近端中心粒位于核后极的核陷窝(nuclear fossa)中,在顶体颗粒形成的过程中,鞭毛也开始形成(图版Ⅰ-4),其主段结构与成熟时的已十分相近(图版Ⅰ-6),终环清晰可见(图版Ⅰ-7)。 2.3 顶体囊泡状突出的原因 在染色质开始浓缩前,核移向胞质中的一个离心的位置,这一移动引起胞质的重新安排,大多数细胞器,如线粒体和内质网移向精细胞的后极,同时,顶体囊泡变扁平(图版Ⅰ-7、图版Ⅰ-8)。靠核前区域形成突起,即将来的核喙(nuclear rostrum)或称核尖(nuclear point)。在此期,核质不甚清晰,双层核膜明显,核内染色质颗粒呈短丝状排列,核延长(图版Ⅰ-8)。 2.4 小鼠骨髓顶体及核型的组织演变 精子形成接下来的过程是核和细胞的延长,与此同时,染色质浓缩(图版Ⅰ-9)。核的分化包括变长和核质的丢失,形成子弹形核,染色质变成粗纤维状,在横切面上交织成网状,网眼内核质电子透明(图版Ⅰ-10)。随着核的进一步延长,其前端形成一个突起,推着顶体囊泡使其行进性凹陷,囊泡内的顶体颗粒弥散成细小的颗粒物质。顶体下腔(subacrosomal space)扩大,粗大而电子致密颗粒散开,充满整个顶体下腔。这意味着顶体复合体(acrosomal complex)分