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术中冰冻切片技术要点 摘要】冰冻切片的质量直接关系到术中是否能做出正确的病理诊断，要求技术 人员对制片的每一个环节都精益求精，保证冰冻切片质量。文章结合实际对冰冻 切片制作中的技术要点进行总结。 【关键词】术中；冰冻切片；技术 【中图分类号】R61 【文献标识码】A 【文章编号】 2095-1752（2016）26-0208-02 冰冻切片是指术中新鲜组织在低温条件下快速冷却到一定硬度再进行切片的 方法。冰冻切片的质量直接关系到术中是否能做出正确的病理诊断，而快速病理 诊断已成为临床手术医师进行确诊及制定合理手术方案的依据，一张优质的冰冻 切片是病理诊断医师进行正确诊断的前提，而一张质量差的冰冻切片，会使病理 诊断医师无法进行诊断，极易造成误诊。所以，能否制作一张高质量的冰冻切片 至关重要。现将本科室在冰冻切片制作中的技术要点、注意事项介绍如下。 材料和方法 1.1材料 Thermo快速冰冻切片机 临床术中送检新鲜组织OCT包埋剂（从公司购置） 固定液：AF液（甲醛10ml 95%乙醇85ml冰醋酸5ml）其他试剂按病理科常规 工作配制，使用。 1.2方法 将术中送检新鲜组织取材，组织块应大小合适，厚薄均匀，直接置于冰冻托 盘上，再在组织块周围加一圈OCT，设定冰冻的温度和时间，切片厚度5微米最 佳，块速用载玻片粘片后放入AF液中固定2分钟左右，充分水洗后苏木素染色、 分化、蓝化、伊红染色、酒精（浓度75%-85%-95%-100%）脱水、透明、封片。 结果 切片完整，厚薄均匀，无皱褶，无裂痕、冰晶，无脱片现象，细胞形态结构 清晰，核浆对比鲜艳，符合诊断要求。 讨论 现代临床医学水平的不断提高，对冰冻切片的要求也随之提高。而冰冻切片 质量的好坏直接影响了快速病理诊断的准确性，这就要求技术人员对制片的每一 个环节都精益求精，保证冰冻切片质量。在日常工作中我总结了一些冰冻制片过 程中的要点介绍如下。 3.1取材 取材组织大小2x2x0.3cm为佳，避免组织与水接触，用吸水纸将组织块水分、 血液充分吸干，组织块周围脂肪组织、钙化物、骨组织应尽量切除，防止造成切 片困难。取材刀要锋利，不可来回拉扯组织，镊取组织需用无齿镊，避免挤压， 造成人为假象，使诊断困难甚至误诊。 3.2包埋 包埋剂为OCT，组织块需包埋平整，放置于冷冻托盘中央，为避免组织块脱 落，在组织底部及周围放入适量OCT，迅速放入冰冻机内，OCT不能过多，否则 会影响冷冻时间而产生冰晶，不利于诊断。囊壁样组织应竖立包埋，垂直放于冷 冻托盘上，使切面含囊壁全层，利于切片和诊断。小组织包埋时，需先制作一 OCT冻托将底部垫高，在OCT半凝固时，将组织包埋进OCT，再滴加少量OCT在 组织上，然后迅速冷冻。 3.3冷冻的时间和温度 3.3.1冷冻温度平时将冰冻切片机温度设定为-25°C, 24小时待机状态，防止 慢速冷冻产生冰晶，破坏组织形态结构。工作中应根据术中送检组织的类型而设 定不同的冷冻温度：皮肤、肌肉组织-22?-26C，脾脏、甲状腺、淋巴结、肝组 织-18C?-20C，食管、子宫、胃肠组织-23C?-25C,含脂肪组织-25C?-30C, 脂肪组织-30C左右。 3.3.2冷冻时间根据术中送检组织的类型调节不同的冷冻时间，含脂肪较多 的组织8?15分钟。脂肪组织10?15分钟。肝、脑组织3?5分钟，冷冻时间过 长，组织变脆，易碎。甲状腺、前列腺组织冷冻时间稍短，3?5分钟，若冷冻时 间过长，切片会形成大小不等的空洞，影响诊断，可用拇指轻按组织2?3秒再 切片。子宫肌瘤冷冻时间不宜过长，会使组织变硬，造成切片困难。 3.4切片 冷冻包埋剂先从四周开始冷冻，逐渐向中间变白，包埋剂发白变硬后，为切 片最佳时机。检查刀座、防卷板是否紧固，更换锋利刀片，调整切片刀角度，清 洁及调整防卷板，防止切片污染、皱褶。切片厚度5微米，切片时用力缓慢均匀， 修平组织暴露组织最大切面，有包膜一定要切完整，必要时可多个切面切片，防 止没有切到位而漏诊。对于微小癌及细小组织，诊断医师一定要和技术员沟通， 做好标记，防止过度深修，把病变组织修掉而发生漏诊、误诊。粘片时玻片一定 要干净，防止掉片，动作应快，防止切片产生皱褶。 3.5固定 固定的最佳时机是在切片后马上把粘好组织的玻片放入固定液中固定，若不 及时放入固定液，切片晾干后固定，易造成细胞退变，使核染色不清，影响诊断。 我科选用AF固定液，固定时间1分钟，经它固定的冰冻切片染色核浆对比分明， 红蓝适度，固定液应经常更换，保持新鲜。 3.6染色、封片 染色程序：AF固定液1分钟后充分水洗，苏木素染色1分钟，水洗1分钟盐 酸酒精分化，水洗，温水蓝化，水洗，伊红染色5?6秒后酒精脱水(浓度75%- 85%-95%-100%)，二甲苯透明，中性乳胶