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卵母细胞发育、受精和卵裂的关系 卵石是一个微环境。它含有许多对卵细胞发育有重要影响的生物活动因素和激素。抗苗勒管激素(AMH)是转化生长因子β超家族成员之一,是由560个氨基酸残基组成的糖蛋白,相对分子量140 000,具有调节细胞发育及分化,并使雄性胚胎苗勒管退化的作用。近年研究发现,AMH在调控卵泡生长和发育中具有一定作用。人卵泡液中也含有AMH,但其对人卵母细胞的作用,尚不十分清楚。本文旨在观察超促排卵周期人卵泡液中AMH水平及其与卵母细胞生长发育、受精及卵裂的关系。 1 临床数据 1.1 殖中心因输注常州市患者年龄分布 选择2007年5月—2008年5月在我院生殖中心因输卵管梗阻做试管婴儿的患者60例,年龄25～35岁,平均31岁。患者月经规律,内分泌、抗精子抗体及丈夫精液检查均正常。 1.2 方法 1.2.1 肌肉注射基因重组fshrfsh 长方案超促排卵,即在前次月经周期的黄体高峰期开始,肌肉注射促性腺激素释放激素激动剂醋酸曲普瑞林,月经周期第3天开始肌肉注射基因重组的FSH(rFSH,商品名果纳芬,瑞士雪兰诺公司产品)超促排卵,待卵泡成熟,肌肉注射绒毛膜促性腺激素(HCG)(丽珠公司产品)10 000 IU,34～36 h后取卵。 1.2.2 性卵母细胞处理 阴道超声指引下穿刺取卵,保留卵泡18 mm、清亮、无血染、含有卵母细胞的卵泡液,3 000 r/min离心,-80 ℃度低温保存。取卵当日,抽患者静脉血2 mL,分离血清,-80 ℃低温保存。 1.2.3 卵丘及冠状 体式显微镜下确定每份卵泡液中卵母细胞的成熟度。①成熟卵母细胞:卵丘松散,放射冠放射状排列,可见透明带和第一极体;②不成熟卵母细胞:卵丘紧密,放射冠紧包卵子,透明带不清楚,无第一极体。 1.2.4 卵裂球破碎情况观察 加入精子18 h后,体式显微镜下观察卵子的受精情况。卵子受精标准:出现第二极体,卵细胞内出现2个原核。卵子受精24～30 h后观察胚胎发育情况,根据卵裂球均匀程度和碎片多少,评价胚胎质量:①1级胚胎,卵裂球大小均匀,无碎片;②2级胚胎,卵裂球大小不均匀,碎片10%;③3级胚胎,卵裂球大小不均匀,碎片10%～50%;④4级胚胎,卵裂球大小不均匀,碎片50%。 1.2.5 阿尔哈斯测量 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定卵泡液及血清中的AMH水平,严格按产品说明书操作(美国DSL公司产品)。 1.3 统计处理 卵泡液及血清AMH水平以xˉ±sxˉ±s表示,利用SPSS-PC软件包进行t检验、方差分析。 2 结果 2.1 卵液收集标本 60例患者中,2例收集到4份卵泡液,6例3份,30例2份,22例1份,共收集到卵泡液108份。卵泡液AMH水平26.4～75.9(56.7±11.2)pmol/L,血清AMH水平9.5～35.8(20.7±5.5)pmol/L,两者比较有极显著性差异(P0.01)。 2.2 前后植物群落amh比较 108个卵母细胞中成熟卵母细胞98个,不成熟卵母细胞10个,前者卵泡液AMH水平为(57.3±12.1)pmol/L,后者卵泡液AMH水平为(55.8±9.3)pmol/L,两者比较有显著性差异(P0.05)。 2.3 完善前卵液amh比较 加入精子后18h观察,108个卵母细胞中,受精卵89个,未受精卵19个,前者卵泡液AMH水平为(57.9±11.7)pmol/L,后者卵泡液AMH水平为(54.5±6.6)pmol/L,两者比较有极显著性差异(P0.01)。 2.4 不同植物群落中amh的水平 卵子受精24h后观察,89个受精卵中有80个分裂,形成胚胎,Ⅰ级胚胎40个、Ⅱ级胚胎15个、Ⅲ级胚胎13个、Ⅳ级胚胎12个,其卵泡液中AMH水平分别为(57.2±10.3)pmol/L、(56.9±12.4)pmol/L、(56.4±12.7)pmol/L和(55.6±13.2)pmol/L。Ⅰ级和Ⅱ级胚胎的AMH水平显著高于Ⅲ级和Ⅳ级胚胎的AMH水平,有显著性差异(P0.05);Ⅰ级与Ⅱ级胚胎之间及Ⅲ级与Ⅳ级胚胎之间的AMH水平无显著性差异(P0.05)。 3 讨论 3.1 amh在fsh患者合成卵体诱导的诱导效果 AMH是转化生长因子β超家族成员之一,是由560个氨基酸残基组成的糖蛋白,相对分子量140 000,具有调节细胞发育及分化并使雄性胚胎苗勒管退化的作用。AMH是由卵巢颗粒细胞分泌的活性因子,其在始基卵泡上无表达,在初级卵泡的颗粒细胞上弱表达,在≤4mm的小窦卵泡中强表达,而在4mm窦卵泡中表达逐渐减弱至完全消失。AMH对FSH诱导的卵泡生长发育有抑制作用。Das等发现,在自然周期中,多囊卵巢综合征患者及排卵正常者的卵泡液中AMH水平均较血液为高。有关促排卵周期中卵泡液AMH水平报道较少,其结果也是