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不同种类和浓度促渗剂的隐丹参酮凝胶的处方筛选 隐丹人参酮是从中药丹参中提取的二醇类化合物。根据药理学研究，隐丹参酮可以预防和缓解早期老年轻视、抗菌、抗炎、激素调节和肿瘤。临床上使用丹参制剂治疗炎症性及脓疱性痤疮效果显著, 而隐丹参酮是主要有效成分之一。隐丹参酮脂溶性大, 水中溶解度低, 口服生物利用度差, 市场上无相应制剂品种。 痤疮主要发生于面、胸背等处, 发病率高且反复发作, 形成皮肤损伤, 影响患者生活质量。将隐丹参酮制备成凝胶剂, 可局部给药用于痤疮的治疗。凝胶剂具有良好的生物相容性, 把药物加入凝胶基质后, 可增强黏附性, 减少药物的损失, 提高局部药物浓度, 利于局部皮肤疾病的治疗。本研究将隐丹参酮制备成凝胶剂, 通过考察促渗剂的种类和用量对隐丹参酮凝胶经皮渗透性能的影响, 以皮肤内药物滞留量/稳态渗透速率比为主要指标, 筛选隐丹参酮凝胶的处方。 1 材料表面 1.1 主要设备和试剂 Agilent 1100高效液相色谱仪 (Agilent公司, 美国) , TU-1800紫外检测器 (北京普析通用仪器设备有限公司) , TK-12A型透皮扩散池 (S为2.83 cm2, V为6.8 mL, 上海凯偕科技贸易公司) , KQ-100B型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) , Anke TDL-5-A型离心机 (上海安亭科学仪器厂) , 85-2型恒温磁力搅拌器 (巩义市英峪予华仪器厂) , XW-80A涡旋混合器 (上海医科大学仪器厂) 。 1.2 合成其他化学成分 隐丹参酮 (陕西昂盛生物医药科技有限公司, 批号BH-071125-1) , 隐丹参酮对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号110852-200305) , 卡波姆934L (BF Goodrich Company) , 叠氮化钠 (华东医药股份有限公司) , 羟苯乙酯 (华东医药股份有限公司) , 丙三醇 (浙江杭州双林化工试剂厂) , 三乙醇胺 (江苏鸿声化工厂) , 聚乙二醇-400 (PEG-400, 杭州长征化工有限公司) , 月桂氮■酮 (AZO, 扬州市化工设计研究院) , 薄荷醇 (MEN, 江苏南通医药站) 。本实验所用的甲醇为色谱纯, 其他试剂均为分析纯。 1.3 动物 SD大鼠, 雄性, 体重约200 g, 浙江大学动物实验中心提供, 动物许可证号SCXK (浙2007-0029) 。 2 方法 2.1 隐丹人参酮分析的建立 2.1.1 紫外吸收光谱 取隐丹参酮对照品适量, 用甲醇配制成质量浓度约10 mg·L-1的溶液, 在200～400 nm扫描紫外吸收光谱。隐丹参酮在263 nm处有一吸收峰, 本研究确定λ=263 nm为隐丹参酮的检测波长。 2.1.2 动相甲醇-水-四氢呋喃 Dikma-C18色谱柱 (4.6 mm×150 mm, 5 μm) , 流动相甲醇-水-四氢呋喃 (70∶20∶10) , 检测波长263 nm, 流速1.0 mL·min-1, 柱温40 ℃, 进样量20 μL。皮肤组织的浸出组分在3 min内已被洗脱出柱, 不干扰药物测定, 药物洗脱峰形良好, 见图1。 2.1.3 标准曲线的建立 精密称取干燥至恒重的隐丹参酮对照品适量, 用流动相配置成质量浓度为1, 2, 4, 8, 12, 16, 33.33, 100 mg·L-1的样品, HPLC测定, 以峰面积 (A) 对浓度 (C) 进行回归, 得标准曲线A=116.46C+62.146 (R2=0.999 5) 。结果显示, 在1～100 mg·L-1隐丹参酮的峰面积与浓度线性关系良好。 2.1.4 hplc法 取隐丹参酮适量, 用流动相溶解, 分别配制成质量浓度约为18, 6, 2 mg·L-1的高、中、低3个浓度, 用HPLC法进行测定。RSD为0.59%, 0.46%, 2.2%。可见, 在不同浓度时RSD均小于5%, 符合要求。 2.1.5 乳糜、离心、饮料制备 将经皮渗透试验后的皮肤剪碎置于匀浆器中, 加水3 mL, 充分研磨至皮肤成乳糜状。转移至离心管中, 加入乙酸乙酯5 mL, 涡旋震荡2 min。4 000 r·min-1离心4 min, 取上清3 mL, 氮气吹干。剩余残渣用2 mL甲醇溶解, HPLC测定。 2.2 制造凝胶的准备 2.2.1 促渗剂 凝胶的处方为隐丹参酮0.05 g, 卡波姆934 L 0.15 g, 丙三醇0.75 g, 促渗剂 (MEN或AZO) 一定量, 羟苯乙酯0.01 g, 无水乙醇1.0 mL, 蒸馏水加至10 g。 2.2.2 乙醇胺凝胶的制备 称取处方量卡波姆934 L、甘油至烧杯中, 加适量水溶胀后搅拌, 待完全溶解后, 用三乙醇胺调节pH至7.0, 形成凝胶;将隐丹参酮、羟苯乙酯、