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hplc法测定三两酒中齐墩果酸的含量 3.2毫升是由牛膝、黄原和当归精制而成的。牛膝为该制剂的主药之一,而牛膝的主要活性成分为齐墩果酸。齐墩果酸具有抑菌、保肝、护肝、升白细胞、增强机体免疫功能的作用。药典上未对该制剂的有效成分的含量进行测定。近年来用HPLC法测定一些中药材或简单制剂中的有效成分较多。本文采用高效液相色谱法,测定该复方制剂中齐墩果酸的含量,结果满意。 1 数据工作站 SP高效液相色谱仪,配有8810泵,200UV检测器,N-2000数据工作站。齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号为0709-9803),试剂除甲醇为色谱纯外,其它均为分析纯,水为重蒸馏水。 2 流动相、流速、温度 Hyperisil ODS柱(4.6×250mm,5μm,大连物化所),流动相:甲醇-水(90∶10),流速:0.8ml/min,检测波长:220nm,灵敏度:0.05AUFS,温度:室温。 3 检测波长的选择 经紫外扫描,齐墩果酸的最大吸收为208nm,为降低信噪比,选择220nm为检测波长。 4 实验方法 4.1 标准储备溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的齐墩果酸对照品约4.8mg,用甲醇定容至10ml,摇匀后作为贮备液。 4.2 标准曲线的绘制 精密量取上述标准贮备液0.2,0.4,0.6,0.8和1.0ml分别置于10ml量瓶中,用甲定容后摇匀,各进样20μl,以峰面积Y为纵坐标,进样量X为横坐标绘制标准曲线,回归方程为:Y=40137.5X+1140.2,r=0.9998,进样量在0.192～0.960μg范围内线性关系良好。 4.3 精密度测试 精密吸取48.0μg/ml齐墩果酸对照品溶液20μl,,重复进样6次,测定峰面积。RSD=0.4%。 4.4 重复试验 取同批号的样品6份,按样品测定项下方法操作,测定峰面积。RSD=2.2%。 4.5 加样回收率测定 精密吸取已测得齐墩果酸含量的样品6份,精密加入44g/ml的齐墩果酸对照品溶液0.8ml,按样品测定项下的步骤操作,计算回收率,结果见表1。 4.6 提取含量测定 精密吸取样品50ml置于烧瓶中,加盐酸2ml,加热回流1小时使水解,用石油醚(60～90℃)40ml分三次提取,合并石油醚提取液,蒸干,残渣用甲醇定容于10ml量瓶中,摇匀,滤过,进样20μl,用外标法计算含量,结果见表2。样品及阴性对照液色谱图见图1。 5 齐墩以苷为主,其样品在不同浓度下的溶解度相同 三两半药酒处理时,曾以氯仿、石油醚分别直接提取,结果未发现齐墩果酸峰,可见制剂中所含齐墩果酸常以苷的形式存在。 齐墩果酸是一种水不溶性物质,在氯仿中的溶解度最大。三两半药酒经水解后,以氯仿、石油醚分别提取,结果显示氯仿的提取成分多,齐墩果酸峰不能完全分离。以石油醚提取为佳。 不同厂家,不同批号的样品中齐墩果酸含量有所不同,可能与药材的产地有关,有待于进一步研究。 5.1 5.2 5.3