亚甲蓝-聚乙烯醇缩丁醛-葡萄糖氧化酶生物传感器的研究.docx

亚甲蓝-聚乙烯醇缩丁醛-葡萄糖氧化酶生物传感器的研究 近年来，聚合物膜修复电极的研究呈现出快速增长，并在电压化和传感器等领域得到了广泛应用。对一些导电聚合物膜,如聚吡咯、聚普鲁士蓝、聚间苯二胺、聚中性红等的电化学特性已经进行了大量的研究工作。董绍俊等对该领域的进展以及理论和应用研究做了高度概括。聚亚甲蓝作为一种生物染料,是一种比较活泼的电子转移体,亚甲蓝单体在导电基质上具有良好的电化学行为,亚甲蓝可以在经过电化学活化预处理的玻碳电极上电聚合成具有良好的电活性和电催化性能的导电聚合薄膜。 近年来发现,可在一些纳米材料如金胶体、银胶体上固定生物分子,利用纳米颗粒比表面积非常大、表面自由能高、吸附能力强的特性,酶可在纳米颗粒表面得到强有力的固定,不易从酶膜中渗漏;金溶胶具有很好的生物相容性并且是电的良导体可在酶的氧化还原中心与电极之间传递电子等优点。本文采用纳米金溶胶与聚乙烯醇缩丁醛(PVB)构成复合固酶基质,以溶胶-凝胶法固定葡萄糖氧化酶(GOD)于聚亚甲蓝修饰的玻碳电极表面,制备葡萄糖生物传感器,实验结果证明,该类传感器具有灵敏度高、选择性好、寿命长、抗干扰能力强等特点。 1 实验部分 1.1 仪器、试剂与仪器 CHI660A电化学工作站(上海辰华仪器公司),CS 501_SP型超级数显恒温器(重庆四达实验仪器厂制造),H600型透射电子显微镜(日本日立公司),BRANSONIC200超声清洗仪(德国),AB203_S电子天平(瑞士Mettler-Toledo公司),葡萄糖氧化酶(GOD,EC 1.1.3.4,157 500 units/g,Sigma公司),亚甲基蓝(MB,上海试剂厂),β_D_葡萄糖(A.R,上海试剂厂),聚乙烯醇缩丁醛(PVB,上海化学试剂公司),氯金酸(Sigma公司、避光保存),鞣酸(上海化学试剂公司)。其他试剂如KH2PO4、Na2HPO4、KCl均为分析纯试剂,实验用水均为二次蒸馏水。标准储备葡萄糖溶液放置过夜后使用。保存于4℃冰箱中。 1.2 柠檬酸还原溶液 金溶胶的制备:取一定量的HAuCl4·H2O,加热后,迅速加入柠檬酸溶液还原。所制备的纳米溶胶的颜色为亮红色,其粒径用透射电子显微镜测试为12 nm。 1.3 电极装饰 1.3.1 循环伏安扫描 玻碳电极(GCE)先用Al2O3粉抛光,使成镜面,然后依次用丙酮和纯净水超声清洗。在修饰之前,先将清洗后的GCE电极置于0.5 mol/LH2SO4中进行电化学预处理,以增加电极表面电活性点的浓度。将电极于-0.5~+1.6 V下进行循环伏安扫描,扫速100 mV/s,直至CV曲线达平衡。将处理好的电极洗净后浸入水中备用。 电化学聚合在含5×10-5mol/L亚甲蓝单体(MB)的磷酸缓冲溶液(0.1 mol/L,pH9.0)中进行,0.1mol/LKCl作为支持电解质,扫速100 mV/s。先将电位设定在-0.6~+1.4 V范围内循环扫描10圈,再在-1.4~+0.6 V处扫描15圈。聚亚甲蓝膜(PMB)的厚度可由扫描圈数来控制,聚合后的电极用水洗净后放入pH=6.0~7.0的磷酸盐缓冲溶液中保存。所制得的PMB性能稳定,其电极性能通常能保持两个星期不变。 1.3.2 酶电极制备 取葡萄糖氧化酶(GOD)10μL(20 mg/mL)溶液和0.2 mL纳米金溶胶混合,几分钟后再将2 mL的15 g/LPVB的无水乙醇溶液倒入混合液,并用玻棒搅拌,然后将聚合后的电极浸涂其中,再取出放置10 min挥干成膜,制得酶电极(GOD+Au+PVB/PMB/GCE)。将其悬于pH7.0磷酸盐缓冲液上方在4℃下保存过夜待用。 1.4 循环伏安实验 采用三电极检测装置:饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极作为对电极,葡萄糖氧化酶电极为工作电极。在5 mLpH 7.0浓度为0.1 mol/L的KH2PO4-Na2HPO4缓冲液(含0.1 mol/LKCl作为支持电解质),室温条件下进行循环伏安测试。电位扫描速率为100 mV/s,扫描电位范围为-0.6~+0.2 V(vs.SCE)。记录酶电极对葡萄糖的安培响应,根据还原峰电流值与葡萄糖浓度成正比进行定量测定。当酶电极不使用时,将其于4℃下贮存在pH7.0磷酸缓冲液上方。 2 结果与讨论 2.1 ph值对氧化还原反应的影响 实验表明,亚甲基蓝修饰的玻碳电极的电化学行为受溶液的pH值的影响较大,在酸性溶液中PMB/GCE具有良好的电化学活性和性能。当把溶液pH值从4.0增加到9.0时,PMB/GCE的阳极峰电位和阴极峰电位均向负移,在pH=7.0时,其氧化峰和还原峰电位分别为-240 mV和-360 mV,ΔVp=120mV,亚甲基蓝电对的氧化还原反应可逆性有所下降,这主要是由于氧化还原反应中有H+参与,而随pH值的增加,