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18种中草药提取物对褐飞虱的生物活性 黄褐色门牙虱是水稻科的主要害虫。它具有突发性、隐蔽性和亲水性，具有发芽、隐蔽性和选择性（watanabe和kunga，2000）。自1982年以来, 在我国就有8次大发生, 对水稻生产造成严重危害。甜菜夜蛾Spodoptera exiguaHübner是主要的蔬菜害虫, 由于其食量大、食性杂, 危害多种蔬菜 (牛成伟等, 2006;刘永杰等, 2007) 。在害虫的应急防控措施中化学防治一直占据主要位置, 但长期大量使用化学药剂不仅使生态环境失衡, 而且使许多害虫对化学药剂产生了抗药性, 导致害虫防治更加困难。如上世纪90年代吡虫啉是公认的防治稻飞虱高效杀虫剂, 但10多年后的今天, 吡虫啉在我国大多数稻区对褐飞虱的防效均较差, 已不推荐使用。随着人们对环境、可持续发展、食品安全等问题的重视, 对植物源农药的开发已提上日程。植物源农药较化学农药, 具有源于自然、易降解、不浓缩富集、无残留污染等优点, 且其有效成分的种类多, 是自然的混配复合剂, 对害虫的作用方式多样, 因而害虫不易产生抗性, 对非靶标生物亦比较安全要 (Haqueet al., 2000;Bekele and Hassanali, 2001;Fieldset al., 2001;Tapondjouet al., 2002) 。 目前, 世界各国对3 000多种植物的杀虫活性进行了研究, 其中不乏传统中药 (丁伟等, 2003) , 主要包括楝科植物 (Meliaceae) 印楝、川楝、苦楝, 菊科 (Compositae) 的除虫菊, 豆科 (Leguminosae) 的鱼藤、苦豆子等, 杜鹃花科 (Ericaceae) 的黄杜鹃, 卫矛科 (Celastraceae) 的雷公藤、苦皮藤, 唇形科 (Labiatae) 植物, 瑞香科 (Thymelaeaceae) 植物瑞香狼毒等, 国内外报道中药提取物对害虫或螨具有生物活性的还有百部、毒藜、大黄、藜芦、苦参、银杏等, 其中印楝、川楝、苦楝、除虫菊、鱼藤、雷公藤、苦皮藤等植物提取液已商业化生产, 用于仓储、蔬菜及大田作物害虫防治 (Hoet al., 1996;姚英娟等, 2004, 2005) 。有研究发现印楝素液对鳞翅目害虫有较好的杀虫活性 (Leskovar and Boales, 1996) ;印楝素乳油0.005 mL/L处理对成虫的忌避率为78.3%, 对幼虫的选择性和非选择性拒食率分别为71.8% 和62.9% (侯有明等, 2002) 。 目前植物源农药的开发途径主要有两种:一是以资源植物生物活性提取物为原料生产农药;二是从植物中寻找新的农药活性先导化合物, 进行仿生合成, 研究筛选出具有商品化价值的新农药。第二种方式是当前国内外植物源农药研究开发的重点, 也是我国植物源农药研究发展的主要方向。我国植物资源丰富, 种类繁多, 杀虫植物的应用历史悠久。因此, 我国在植物源杀虫剂的开发利用上有巨大的潜力。寻找新的杀虫植物资源是开发研究植物源杀虫剂的基础, 本研究参考Nathan等 (2007)的方法, 采用水、乙醇、石油醚等不同极性溶剂浸渍提取18种中草药, 通过生物测定筛选具有较好杀虫活性的中药植物, 并对活性较高的中草药杀虫成分进行初步分析, 以期获得新的杀虫植物资源, 为开发研究新型杀虫剂奠定基础。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 s.emagua敏感品 褐飞虱N.lugens和甜菜夜蛾S.exigua均为室内连续饲养多代的敏感品系。试验时, 挑选发育正常、整齐一致的3龄若虫或幼虫备用。 1.1.2 中药粉的制备 供试中草药名录见表1。百部、槟榔、薄荷、榧子、鹤虱、花椒、黄柏、苦楝皮、苦参、雷丸、芦荟、龙胆草、木香、生大黄、生山栀、石榴皮、仙鹤草、吴茱萸等18种中药材, 均购自南京同仁堂药店, 经充分干燥后, 用中药粉碎机粉碎, 制成粗粉备用。 1.2 提取活性物质 1.2.1 浸泡溶剂的选择 取100 g中药粗粉放入1 000 mL三角瓶中, 分别用250 mL的蒸馏水、乙醇、石油醚3种不同极性的溶剂在室温下浸泡15 d。然后用布什漏斗过滤, 再用旋转蒸发仪蒸干溶剂, 即获得油状或浆状的中药粗提取物, 保存于4℃冰箱中供筛选和毒力测定使用。 1.2.2 中药有机溶剂萃取物的制备 在30～40℃水浴条件下用蒸馏水将木香和鹤虱的中药提取物溶解, 分别用等体积的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次, 合并同种溶剂的萃取液并蒸干溶剂, 得到油状或者膏状物质即为中药的有机溶剂萃取物, 保存于4℃冰箱中, 供生物测定使用。 1.2.3 相同rf值洗脱物的流份检测 取鹤虱的氯仿萃取物, 用少量氯仿溶解, 吸附在适量的硅胶上进行吸附层析。选用200～