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小麦抗肺病基因pm21和pm 小麦粉是由专业寄生虫菌引起的小麦粉。这是中国小麦生产的一个重要疾病之一。抗病小麦品种的选育和合理应用是防治该病最为经济、有效和环境安全的措施。然而, 由于白粉菌生理小种变异快、群体组成复杂, 抗病基因往往会因为白粉病菌毒力频率变化或新的毒力型的出现而丧失抗性。因此, 加快抗病种质资源发掘, 实现优异抗病基因累加, 对提高品种抗病广谱性和持久性, 延长抗病品种使用年限具有重要意义。 来源于簇毛麦 (Haynaldia villosa) 的Pm21对现有的白粉菌生理小种均表现免疫, 在不同小麦遗传背景下抗病性表现稳定, 是目前已知抗白粉病基因中抗性最好的抗病基因。来源于高大山羊草 (Aegilops longissima) 的抗白粉病基因Pm13在普通小麦的遗传背景下也能完全表达其抗性, 表现中至高抗。作为优异的抗病基因资源, 正在成为育种工作者利用的重点。同时, 已开发的与Pm21和Pm13紧密连锁的分子标记, 如与Pm13共分离的显性标记SCAR564, 与Pm21共分离的显性标记SCAR1400等, 为抗病育种中抗病单株的有效选择提供了有力工具。张增艳等利用小麦抗白粉病基因Pm4、Pm13和Pm21的特异性PCR标记对含有Pm4b、Pm13、Pm21的小麦品系复交F2代进行检测, 从中选择出含有聚合Pm4b+Pm21+Pm13、Pm4b+Pm13、Pm4b+Pm21和Pm13+Pm21的抗病植株。陈涛等利用与抗白粉病基因Pm21和Pm13连锁的特异标记, 在含有抗白粉病基因Pm21和Pm13的杂交F4代群体中进行辅助检测, 从114个单株中检测出4株同时具有Pm21和Pm13的株系。上述研究中利用分子标记辅助选择, 从杂交群体中有效地筛选了聚合多个抗病基因的植株, 但是由于应用的是显性标记, 不能区分纯合体和杂合体, 筛选出的单株可能是杂合体而在后续世代中发生分离。近年, Cao等开发出了与Pm21共分离的共显性标记CINAU161650, 本课题组筛选到了与Pm13紧密连锁的互斥相标记BE398268, 连锁距离0.5cM。探讨这些标记在辅助检测中的有效性, 对提高抗病基因聚合育种效率至关重要。 本研究选取携带Pm21的种质系07与携带Pm13的种质中大01配制杂交组合, 利用已开发的与抗白粉病基因Pm21和Pm13紧密连锁的分子标记SCAR1400、CINAU161650和SCAR564、BE398268, 在F2代进行分子标记检测, 以明确这些标记在辅助育种中的有效性, 同时选择出聚合有纯合Pm21和Pm13的植株, 从而为小麦抗白粉病育种提供抗性更广、更持久的材料。 1 材料和方法 1.1 抗地选择基因 杂交亲本为中大01和矮抗58改良品系系07, 感病对照为金光588, 均由河南科技学院小麦中心选育和保存, 前期经分子标记检测已经明确中大01携带抗白粉病基因Pm13, 系07携带抗白粉病基因Pm21。杂种F1代自交后产生F2代, F1代和F2代均为春化处理后, 在人工智能温室中按单株种植, 常规管理。 白粉病菌接种及抗性鉴定:白粉病菌采自河南科技学院人工智能温室, 为新乡地区流行小种, 接种采用弹拂法于苗期进行, 当感病对照金光588充分发病时, 调查发病情况, 每隔2d重复调查一次。病级划分按照盛宝钦提出的0~4级法, 其中0和0;为免疫, 1~2级为抗病, 3~4级为感病。 1.2 引用中的合成 检测用引物由英潍捷基 (上海) 贸易有限公司合成, 序列见表1。 1.3 基因组dna提取 取小麦幼苗叶片0.2g左右放入1.5mL离心管中, 液氮研磨后, 采用CTAB法提取基因组DNA, 用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取效果。 1.4 scar564和be39钢的扩增 PCR扩增于ABI Gene Amp PCR System9700型PCR仪上进行。反应体系20μL, 包括2×Taq Master Mix (购自北京康为世纪生物科技有限公司) 10μL, 10×10-6mol·L-1特异引物各0.5μL, 模板DNA 50~100ng, ddH2O补足。 CINAU161650和SCAR1400的扩增程序为94℃预变性5min;94℃变性50s, 54~55℃退火50s, 72℃延伸2min, 38个循环;72℃终延伸10min, 4℃保存。 SCAR564的扩增程序为94℃预变性5 min;94℃变性50s, 55℃退火50s, 72℃延伸50s, 38个循环;72℃终延伸10 min, 4℃保存。BE398268的扩增程序为94℃预变性5 min;94℃变性50s, 60℃退火50s, 72℃延伸1min, 38个循环;72℃延伸10 min, 4℃保存。SCAR564和