《凝结魏茨曼氏菌计数方法》.docxVIP

2 QB/T XXXX-XXXX 凝结魏茨曼氏菌计数方法 1 范围 本文件描述了凝结魏茨曼氏菌的计数方法，包括设备和材料、培养基和试剂、计数程序、试样制备、 操作步骤、结果与报告。 本文件适用于食品用菌种制剂及食品中凝结魏茨曼氏菌的计数。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 凝结魏茨曼氏菌 Weizmannia coagulans 凝结芽孢杆菌 Bacillus coagulans 菌落圆形，表面光滑，白色而有光泽，属于芽孢杆菌科、魏茨曼氏菌属，革兰氏阳性兼性厌氧杆菌， 芽孢中生到次端生，孢子椭圆或柱状，孢囊膨大或不明显膨大，产L(+)-乳酸的细菌。 [来源: QB/T XXXX-2023,3.1] 4 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下: 4.1 天平：感量0.01 g。 4.2 pH计：精确度0.1。 4.3 拍击式均质器及无菌均质袋。 4.4 涡旋混合器。 4.5 恒温水浴锅：（80±1） ℃。 4.6 恒温培养箱：（40±2） ℃。 4.7 容量瓶：100 mL 、1 000 mL。 4.8 烧杯：1 000 mL。 4.9 量筒：250 mL 、1 000 mL。 4.10 无菌锥形瓶：250 mL 、500 mL。 4.11 无菌试管：18 mm×180 mm ，15 mm×150 mm。 3 QB/T XXXX-XXXX 4.12 微量移液器及无菌吸头：1 000 μL。 4.13 无菌培养皿：直径90 mm。 5 培养基和试剂 本方法中所用的水，在未注明其他要求时，应符合GB/T 6682中水的规格。所用试剂，在未注明其 他规格时，均指分析纯（AR），在没有注明其他要求时，均按GB/T 603的规定制备。 5.1 生理盐水（9.0 g/L） 称取9.0 g氯化钠，蒸馏水充分溶解后，定容至1 000 mL ，分装后121 ℃高压灭菌15 min~20 min 。用 于试样制备溶解样品时应按比例添加0.5%吐温-80。 5.2 蛋白胨水溶液（1.0 g/L） 称取1.0 g胰蛋白胨，5.0 g吐温-80 ，蒸馏水充分溶解后，定容至1 000 mL ，分装后121 ℃高压灭菌15 min~20 min 。用于试样制备溶解样品时应按比例添加0.5%吐温-80。 5.3 氢氧化钠溶液（2 mol/L） 称取8.0 g氢氧化钠，蒸馏水充分溶解后，定容至100 mL，分装后121 ℃高压灭菌15 min~20 min。 5.4 乳酸溶液（2 mol/L） 称取21.2 g质量分数为85%的L-乳酸，蒸馏水充分溶解后，定容至100 mL，分装后121 ℃高压灭菌 15 min~20 min。 5.5 凝结魏茨曼氏菌计数（Weizmannia coagulans count ，WCC）培养基 葡萄糖5.0 g、蛋白胨10.0 g、酵母粉5.0 g、牛肉膏5.0 g、氯化钠0.25 g、无水氯化钙0.15 g 、一水合 硫酸锰0.1 g 、L-半胱氨酸盐酸盐0.5 g 、琼脂粉15.0 g ，加入1 000 mL蒸馏水，用氢氧化钠溶液（5.3）或 乳酸溶液（5.4）调节pH至5.0~5.5，加热溶解，分装至锥形瓶中，121 ℃高压灭菌15 min~20 min。 6 计数程序 凝结魏茨曼氏菌按图1所示程序进行计数。 图1 凝结魏茨曼氏菌计数程序 4 QB/T XXXX-XXXX 7 试样制备 7.1 菌种制剂 以无菌操作称取1 g样品，置于装有99 mL无菌生理盐水（5.1）或蛋白胨水溶液（5.2）的无菌均质 袋中。 7.2 可直接溶解食品（表面喷涂的加工坚果与籽类、即食谷物、饮料、不含颗粒的乳及乳制品等） 以无菌操作称取25 g（mL）样品，置于装有225 mL无菌生理盐水（5.1）或蛋白胨水溶液（5.2）的 无菌均质袋中。 7.3 需加热溶解食品（可可制品、巧克力和巧克力制品及糖果等） 以无菌操作称取25 g样品，置于装有温度为55 ℃的225 mL无菌生理盐水（5.1）或蛋白胨水溶液（5.2） 的无菌均质袋中。 7.4 需粉碎食品（焙烤食品、含颗粒的乳及乳制品等） 以无菌操作将足够数量的整份独立包装样品粉碎处理并混匀，称取25 g处理后样品，置于装有225 mL无菌生理盐水（5.1）或蛋白胨水溶液（5.2）的无菌均质袋中。部分难粉碎样品可按