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分光光度法测定菠菜中铁的含量 铁不仅是人体所需的元素之一，也是生命体系中最具元素之一。铁是血红蛋白、肌球蛋白和细胞色素中的重要成分,不仅能传递氧,还能促进脂肪氧化。铁离子在生命体系中的浓度应基本维持恒定,如果不足或过量都有危害。研究表明,缺铁会引起缺铁性贫血、溶血性贫血和再生障碍性贫血,缺铁性贫血使人四肢无力、气喘,过多则会导致急性中毒。据世界卫生组织调查,缺铁性贫血几乎遍及全球,占世界人口10%～20%。因此铁离子的存在形式、浓度、含量分布等监测和研究,不仅对于营养学、病理学、临床诊断都有着重要的指导意义,而且对改善人们摄铁环境,指导人们合理膳食,预防因缺铁或摄入铁元素过多所引起的疾病,具有一定的参考价值,同时,对进一步开发、利用蔬菜类产品提供了可靠的理论依据。 目前,测定铁元素的方法有火焰原子吸收分光光度法、ICP-AES法、容量法、分光光度法、荧光光度法,以及在普通光度法基础上发展起来的胶束增溶光度法、双波长光度法、导数光度法、催化光度法、固相光度法、流动注射光度法等。分光光度法因其简便、快速、准确、不需特殊仪器而具有推广和普及价值。我们采用分光光度法,在pH=3～9条件下,用盐酸羟胺将Fe3+还原为Fe2+,Fe2+再与邻二氮菲生成橙红色络合物,再用分光光度法测定新鲜菠菜中铁元素的含量。该法操作简便,节约实验成本和时间,而且测量结果相对准确。 1 配制铁、邻二氮菲、盐酸羟胺溶液 722型分光光度计(上海分析仪器总厂),FA1004N型电子分析天平(上海天平仪器总厂)。 铁标准溶液:称取0.1670 g NH4Fe(SO4)2·6H2O,加入20 mL 2 moL/L HCl溶液,溶解后移入500 mL容量瓶中,以蒸馏水稀释至刻度,摇匀,即得铁含量为100μg/m L的储备液,取50.0 mL储备液于500 mL容量瓶中,稀释为10.0μg/mL的铁标准溶液;邻二氮菲溶液:1.0 g/L(临用时配制,应先用少许酒精溶解,再用水稀释);盐酸羟胺溶液:10 g/L;缓冲溶液:将30 mL冰醋酸和30 g无水醋酸钠溶于100 mL水中,稀释至500 mL,得到pH=4.6的缓冲溶液。 2 实验内容 2.1 邻二氮菲对naac吸收曲线的绘制 用移液管准确移取10.00 mL的铁标准溶液于50.00 m L容量瓶中,然后加入4.00 mL 10.0 g/L盐酸羟胺溶液,摇匀放置2 min,再加入5.00 mL 1.0 mol/L NaAc溶液及4.00 mL 1.0 g/L邻二氮菲溶液,以蒸馏水稀释至刻度,摇匀放置5 min后,用1 cm吸收池,空白试剂作参比,在波长450～550 nm之间,每隔10 nm测定其吸光度,绘制吸收曲线(图1)。 由图1可知,Fe(II)-邻二氮菲体系,生成三元络合物后,其最大吸收波长为510 nm。 2.2 ph值的测定 准确移取标准液10.00 mL于100.00 mL容量瓶中,加入1.00 mL 1 mol/L盐酸溶液和4.00 mL10.0 g/L盐酸羟胺溶液,摇匀放置2 min后加入4.00 mL 1.0 g/L邻二氮菲溶液,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,备用。分别用移液管准确移取上述溶液10.00 mL于7只编号的50.00 mL容量瓶中,并依次在容量瓶中加入0.5 mol/L氢氧化钠溶液0.00、2.00、3.00、4.00、6.00、8.00及10.0 mL,以蒸馏水稀释至刻度,摇匀静置5 min,测定各容量瓶中溶液的pH值。同时以空白试剂为参比,510 nm为测定波长,测定各溶液的吸光度A。实验表明,pH值在4.0～5.0范围内,有色配合物的吸光度最大且基本不变。测定时加入1.0 mol/L的NaAc溶液和显酸性的盐酸羟胺溶液可形成HAc-NaAc缓冲溶液,能够保持测定过程pH值稳定,简化测定手续。实验发现,加入5.00 mL 1.0 mol/L NaAc溶液,使溶液pH≈5时,显色效果最好。 2.3 盐酸羟胺溶液配制 在7只50.00 mL容量瓶中各加10.00 mL10.0μg/mL铁标准溶液和4.00 mL 10.0 g/L盐酸羟胺溶液,摇匀后放置2 min。加入5.0 mL 1.0 mol/L乙酸钠溶液,再分别加入2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00 mL 1.0 g/L邻二氮菲溶液,以蒸馏水稀释至刻度,摇匀静置5 min,以空白试剂为参比,在选定波长510 nm下测定各溶液的吸光度,确定显色剂的适宜用量。 2.4 盐酸羟胺溶液 在7只50.00 mL容量瓶中各加10.00 mL10.0μg/mL铁标准溶液,再加1.50、2.00、2.50、3.00、3.50、4.00、4.50 mL 10.0 g/L盐酸羟胺溶液,摇匀后放置2 min。加入5.