《中华人民共和国药典》淫羊藿总黄酮的含量测定.docxVIP

《中华人民共和国药典》淫羊藿总黄酮的含量测定 阴阳避阳药是2000年版《中华人民共和国药典》的一个品种。它具有补充肾阳、强身健骨、防风湿的功能。淫羊藿总黄酮 (TFE) 是其主要活性成分, 目前常以 TFE 含量高低作为判断淫羊藿质量优劣和提取分离工艺的指标。TFE 的含量测定方法采用紫外分光光度法, 以淫羊霍苷为对照品, 在 270 nm 测定。笔者认为上述测定方法存在一些问题, 即样品是否存在 270 nm 有吸收的非黄酮成分?通过对以上问题的研究, 建立了 TFE 的含量测定方法:样品经提取、三氯化铝络合后, 采用分光光度法, 在 413 nm 处, 以淫羊藿苷为对照品测定含量。 1 药品、药材与药品 UV—2401PC 型紫外分光光度计 (日本岛津公司) ;淫羊藿苷对照品, 中国药品生物制品检定所, 批号为 0737—9910;淫羊藿药材购自安国民生药材行, 经刘珂教授鉴定为淫羊藿Epimedium brevicornumMaxim.。试验所用其他试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 对照溶液的制备 精密称取淫羊藿苷对照品适量, 加甲醇制成 0.1 mg/mL 的溶液, 即得。 2.2 供试品溶液的制备 取干燥的淫羊藿叶粉末 (过40目筛) 约 0.2 g, 精密称定, 置 50 mL 具塞锥形瓶中, 精密加入稀乙醇 20 mL, 密塞, 称定质量, 超声处理 1 h, 再称定质量, 用稀乙醇补足减失的质量, 摇匀, 滤过, 取续滤液 1 mL, 置 10 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 作为供试品溶液。 2.3 紫外吸收光谱法 精密量取淫羊藿苷对照品溶液和供试品溶液各 1.0 mL, 置 10 mL 量瓶中, 加甲醇定容至刻度, 摇匀, 用甲醇作空白液, 按分光光度法, 在 200~500 nm 范围内进行扫描, 记录紫外吸收光谱, 见图1。精密量取淫羊藿苷对照品和供试品溶液各 3.0 mL, 置 10 mL 量瓶中, 加 1% AlCl3(甲醇) 1.0 mL, 摇匀, 室温放置 15 min, 同法制得空白液, 按分光光度法, 在 200~500 nm 范围内进行扫描, 记录紫外吸收光谱, 见图2。 根据测定结果可看出, 通过显色后再采用紫外分光光度法, 在 413 nm 处测定, 可以避开杂质的干扰, 测定结果更合理。 2.4 alcl3甲醇用量的影响 精密量取淫羊藿苷对照品溶液 3.0 mL 6 份和供试品溶液 3.0 mL 6 份, 分别置 10 mL 量瓶中, 各精密加入 1% AlCl3(甲醇) 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 mL, 分别用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 室温放置 15 min。同法制得 6 份空白, 按分光光度法, 在 200~500 nm 波长范围内进行扫描。结果表明:1) 1% AlCl3(甲醇) 的用量在 0.2~4.0 mL 范围内不影响测定结果;2) 在 413 nm 处未经显色时几乎无吸收, 显色后有吸收峰。为更好地避开干扰, 故选择在 413 nm 处测定, 显色剂用量定为 1%AlCl3(甲醇) 1.0 mL。 2.5 测定用户吸光度 淫羊藿苷对照品溶液和供试品溶液显色后, 放置不同时间测定吸光度。结果表明, 淫羊藿苷对照品溶液和供试品溶液显色后 15~120 min 内显色稳定, 吸光度变化不大。 2.6 alcl3甲醇 精密量取淫羊藿苷对照品溶液 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 6.0, 8.0 mL, 分别置 10 mL 量瓶中, 精密加入 1% AlCl3(甲醇) 1.0 mL, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 放置 15 min。同法制得空白液, 按分光光度法, 在 413 nm 波长处测定吸光度, 以淫羊藿苷对照品浓度为横坐标, 吸光度为纵坐标, 绘制标准曲线, 进行线性回归, 得回归方程为:Y=0.0 144X-0.000 9 相关系数:r=0.999 9, 结果表明, 淫羊藿苷对照品在 10.04~80.32 μg/mL 线性关系良好。 2.7 加标回液精密度试验 取供试品溶液 3.0 mL, 置于 10 mL 量瓶中, 对同一供试品溶液连续测定 5 次, RSD=0.37%, 结果表明该方法精密度良好。 2.8 加样回收率试验 取淫羊藿样品 5 份, 每份约 0.2 g, 精密称定, 置 50 mL 具塞锥形瓶中, 分别精密加入淫羊藿苷对照品约 15 mg, 按供试品溶液制备方法制备供试品溶液, 取供试品溶液 3.0 mL, 置于 10 mL 量瓶中, 测定含量, 计算得平均回收率为 99.94%, RSD=1.42%。 2.9 供试品溶液测定 取同一批淫羊藿样品 5 份, 分别按供试品溶液制备项下的方法制备供试