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产前超声的应用 世界上大约有500万努力创造的儿童出生，这给家庭和社会带来了巨大的精神和经济负担。因此, 广泛开展产前筛查与诊断, 及早发现严重致残或致死性异常并终止妊娠是防治出生缺陷的重要措施。传统的产前诊断是通过侵入性方法获取胎儿组织, 如羊水、绒毛、脐血后提取DNA, 对其进行基因分析, 获得产前诊断结果, 判断胎儿预后。随着新技术的应用, 特别是分子生物学技术和医学遗传学的发展, 产前诊断技术不断地朝着早期、快速、准确、无创伤的方向发展, 使得越来越多的出生缺陷能够在胚胎发育的较早期, 安全、准确地诊断出来。 一、 无创伤产前诊断技术 1. 离成虫的筛查 可供筛查的血清生物学指标有:甲胎蛋白 (AFP) 、游离雌三醇 (uE3) 、人绒毛膜促性腺激素 (hCG) 、妊娠相关蛋白 (PAPP-A) 、抑制素A等, 由于单项检查阳性率低, 特异性差, 往往采用联合筛查的方法。 2. pgd技术的应用 是受精卵分裂到4～8个细胞, 在植入前取单个细胞做细胞遗传学检查或基因诊断。此法特别适用于有高风险生育遗传病患儿的夫妇, 如囊性纤维化病、甲型血友病、脆性X综合征等。尚未见PGD技术对胚胎有任何有害作用的报道。对染色体缺陷患者或染色体异常携带者, PGD可避免遗传病儿出生, 在胚胎器官分化前即可做出诊断, 并有可能进行基因治疗。 3. 细胞、细胞活力 妊娠早期进行宫腔或后穹隆灌洗, 可获得大量滋养细胞, 用于细胞遗传学的诊断。但该操作需注意母体细胞的污染, 操作不当可引起出血及流产, 实验室技术要求比较高, 目前还处于临床试验阶段。 4. 新生儿出生缺陷筛查 超声具有无创、操作简便、重复性好等优点。临床研究表明, 染色体异常的胎儿通常存在某些组织器官解剖结构的异常, 这为超声在产前诊断中的应用提供了可能性。加之一些分辨率高、图像处理好的超声仪器不断问世, 超声在胎儿出生缺陷的筛查和诊断方面, 作用越来越大。常用的超声标记有胎儿颈项透明层厚度 (nuchaltranslicency, NT) 、鼻骨、肱骨长度、脏器的测量等。 5. x线检查 孕16周后, 胎儿四肢的长骨、短骨和肋骨等已经骨化, 可通过X线诊断其是否畸形。但由于射线可能对胎儿造成不利影响, 临床很少应用。 6. 核磁共振成像检查 适用于超声检查无法明确诊断的病例。美国食品与药品监督管理局指出, 因磁共振成像检查对器官发育的影响尚不清楚, 应避免在妊娠12周前做磁共振成像检查, 应在胎儿6～9个月时进行。 7. 部遗传信息不稳定 从孕妇血中分离胎儿细胞是无创性产前诊断的一种确定方法。孕妇外周血中的胎儿有核红细胞含有胎儿的全部遗传信息, 且只在当次妊娠中存在, 正常成人外周血中几乎无有核红细胞, 被认为是母血中最适于产前诊断的胎儿细胞。但由于其细胞数量太少, 富集、分离技术操作复杂, 且价格昂贵, 限制了其临床应用。近年来, 孕妇外周血中胎儿游离DNA的发现, 为我们提供了一种无创性产前诊断的新途径。 二、 孕妇出血期间离开胎儿的dna 1. 新生儿dna的分离 1996年, Chen等首次在肿瘤患者血浆和血清中检测到肿瘤特异性DNA序列。基于这一现象, 有学者认为, 在免疫学上胚胎对于母体类似于肿瘤对于机体, 将胎盘的部分行为称为伪恶性, 在母血中可能存在胎儿DNA。1997年, Lo等以孕男胎妇女作为研究对象, 用快速煮沸法从孕母血浆及血清中提取DNA, 应用PCR技术扩增出胎儿Y染色体特异序列 ( SRY) , 首次证明了孕妇外周血中游离胎儿DNA的存在。 2. 胎儿dna的凋亡与释放 孕妇血浆中胎儿游离DNA 的来源及释放机制仍未阐明, 一般认为有以下来源:①来自孕妇血液中的胎儿细胞。胎儿细胞通过胎盘屏障渗透到母体, 被母体的免疫系统识别为异物, 受到免疫攻击, 致使细胞核膜溶解, DNA释放入母血循环中。②有研究使用荧光原位杂交技术对胎儿有核红细胞进行凋亡检测, 42%的细胞标记为阳性, 提示可能是胎儿组织在发育过程中自然凋亡, 释放出的DNA经母-胎界面进入母血循环中。有证据表明, 游离胎儿DNA具有凋亡DNA片段的一些特征。③胎儿DNA直接从胎儿组织中释放, 经母-胎界面进入母血中, 药物终止妊娠的妇女血浆中的胎儿DNA含量持续升高直至胚胎排出。④来源于胎盘滋养细胞, 推测胎儿DNA可能是母体和胎儿界面的滋养细胞破坏后直接释放的结果。Ohashi等证实, 孕妇血浆中胎儿DNA水平和血浆中绒毛膜促性腺激素 (hCG) 水平呈平行关系。⑤血浆中胎儿DNA升高可能与其清除率下降有关, 肝肾是清除胎儿DNA的主要器官, 而一些妊娠合并症例如子痫前期-子痫, 孕妇的肝肾功能下降, 而导致胎儿游离DNA异常增高。 3. 妊娠合并胎儿游离dna的分离效果 ①含量高于