基于整体功能代偿疗法探讨香砂六君丸对慢性肾衰大鼠的干预作用.docxVIP

基于整体功能代偿疗法探讨香砂六君丸对慢性肾衰大鼠的干预作用 慢性肾功能衰竭（rcg）是一种缓慢发生的临床综合征，以各种慢性肾脏疾病为基础。本病影响患者生活质量且预后不良, 是危害人类健康的重大疾病。本实验基于“整体功能代偿疗法”探讨增强脾的代偿功能对腺嘌呤所致慢性肾衰模型大鼠24 h尿蛋白定量 (24 h UPro) 、血肌酐 (Scr) 、尿素氮 (BUN) 以及肾脏病理的影响, 进而基于“慢性肾衰整体功能代偿疗法”探讨增强脾的代偿功能对CRF模型大鼠肾脏功能的影响。 1 材料和方法 1.1 动物技术标准 健康雄性Wistar大鼠40只, 体质量 (200±30) g, 购自北京维通利华实验动物技术有限公司, 合格证号:SCXK (京) 2009-0004。于北京中医药大学基础医学院普通级实验室饲养。 1.2 材料、试剂与仪器 中成药香砂六君丸, 中药大黄 (粉) 均由北京同仁堂有限责任公司提供。蒙诺 (福辛普利钠片) (批号:国药准字 。腺嘌呤 (分子式C5H5N5, 分子量135.13) (纯度≥98%) 、尿液分析试条 (化学分析法) 、尿微量白蛋白试剂盒及校准品、血肌酐测定试剂盒 (除蛋白法) (100T) 、BUN测试盒、水合氯醛、10%中性甲醛等, 均由北京百诺威生物科技有限公司提供。使用的全自动生化分析仪GLYMPUS、LD25-2低温自动平衡离心机等, 均由北京中医药大学科研中心提供。 1.3 大鼠造模方法 将40只大鼠随机分为空白组、模型组、香砂六君丸加大黄粉组、福辛普利组, 每组10只。本实验参考Yokozawa提出的造模方法, 将1 g腺嘌呤溶于40 m L生理盐水中制成混悬液, 浓度为2.5%, 按200 mg/ (kg·d) 剂量, 每日定时给30只大鼠 (模型组、香砂六君丸加大黄粉组、福辛普利组) 灌胃。空白组大鼠灌胃等体积生理盐水。全部大鼠自由摄取普通饲料、饮水, 造模周期共4周。第4周末每组随机处死2~3只大鼠进行指标对比, 判断造模是否成功。 1.4 给药、检测 采用随机数字表法进行完全随机化分组。大鼠适应性饲养1周后, 模型组、香砂六君丸加大黄粉组、福辛普利组采用临时性标记法 (3%~5%苦味酸溶液涂染法) , 同时进行称质量、目测蛋白试纸进行尿液中蛋白质的初步检测。于实验第5周开始, 参照药理学实验动物给药方法, 香砂六君丸加大黄粉组给予中成药香砂六君丸加大黄粉悬浊液灌胃, 福辛普利组给予福辛普利钠片悬浊液灌胃, 空白组每日灌胃等剂量生理盐水, 模型组不给药、不干预治疗。给药至第8周末结束。在此过程中, 根据大鼠的体质量变化调整给药剂量。 1.5 血清学指标检测 于实验第4周、第8周末分别将各组大鼠单个置于清洁代谢笼中做平行对照 (限制饮食, 不限饮水) , 每个接尿瓶中滴入甲苯0.2 m L防腐, 进行蛋白质定性及24 h尿蛋白测量。于实验第8周末, 水合氯醛麻醉40只大鼠后, 腹主动脉取血3 m L。血液收集后立即以3000 r/min低温高速离心15 min, 移液枪分离血清, 全自动生分析仪测血清Scr、BUN等生化指标。并在取血后迅速剥离肾脏周围结缔组织, 距肾门1 mm处摘除肾脏肾, 沿矢状面剖开残肾, 生理盐水冲洗, 无菌纱布轻轻吸干组织表面水分, 置于10%中性甲醛溶液中固定, 留做肾脏病理切片备用。 1.6 统计处理 应用SPSS19.0统计软件。计量资料以 (ue0af±s) 表示, 组间比较采用方差分析。P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 香砂六君丸对慢性肾衰大鼠造模成功的作用 见表1。实验第4周末, 模型组与正常组比较, 大鼠24 h尿蛋白定量明显升高 (P0.05) , 差异有统计学意义。表明腺嘌呤诱导的慢性肾衰大鼠造模成功。实验第8周末, 香砂六君丸加大黄粉组、福辛普利组与模型组比较, 24 h UPro差异有统计学意义 (P0.05) 。香砂六君丸加大黄粉组与福辛普利组24 h UPro水平相当。 2.2 血清scr、bun水平 见表2。实验第8周末, 香砂六君丸加大黄粉组、福辛普利组与模型组比较, 血清Scr、BUN水平降低, 差异有统计学意义 (P0.05) 。香砂六君丸加大黄粉组与福辛普利组BUN、Scr水平相当。 2.3 残余小鼠肾组织结构变化 第8周末模型组大鼠肾脏显著肿大, 经肾脏病理HE染色光镜下可见部分肾小球萎缩消失, 残余肾小球结构不清, 主要表现为球囊变小;部分可见间质纤维化。香砂六君丸加大黄粉组与福辛普利组肾小球大部分存在, 结构欠清。见图1。 3 “慢性肾衰整体功能偿还”与“肾同病”中的涉及多认识参与功能 CRF属难治病, 既没有明确其病因病机, 也找不到特效药物。据国际肾脏病学会统计, CRF发病