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克隆背后，从克隆羊到克隆猴 摘要 中国的科学家们利用与克隆羊多莉一样的体细胞克隆技术，掌握着世界的克隆成功的主导权。这个结果是在2018年1月25日在cell刊登。本文分析了羊的克隆、克隆猴子的困难和国内外研究状况，并在中国阐述了克隆技术的技术革新，展示了克隆技术的前景。 关键词：克隆动物；克隆猴；体细胞核移植 1.克隆的概念 “克隆”是指拥有与原来的生物完全相同的遗传信息的生物的创造。原本指的是复制基因，但现在广泛使用，超过了这个意义。分子生物的克隆是指，主要是复制DNA，在细胞学上培养相同的基因细胞，这意味着从动物学中获得同步性基因的生物个体。 许多单个的动物的特点是基因控制,所以基因组核脱核卵母细胞或早期胚胎细胞被移植,进一步发育,否则将会被移植的个体具有同样特性,得到个体,即体细胞核移植(scnt)技术。所谓狭义的动物克隆是指使用目前大部分动物克隆中使用的体细胞核移植技术的克隆。 2.克隆羊的诞生 高等动物羊、鼠、牛的克隆分别是1984年、1986年、1994年发生的，但并不是使用成熟的体细胞，而是使用了胚胎分离技术，因此其影响很小，因此没有受到关注。但是，克隆技术很快在人群当中传播，引起不小的关注，从生物学开始对普通人的这个专业词汇和对科幻电影的用词进行了探讨。这是英国的科学家keith campbell用从成熟体细胞克隆了一只羊，也就是被称为“多莉”的成熟的体细胞克隆了羊。 多莉在出生时在世界上很有名，死后也是世界上最有名的动物。277次核移植，29个胚胎，13个代用母羊，最后多莉才出生。因此，有三个母亲提供细胞质、核、子宫。多莉在活了6年以上后，于2003年去世。她养了三个孩子，生了6个后代。 科学研究的结果，第一次吸引了许多人的关注，一般的关注和真正的突破的可能性依然是高度的差异，多莉是最让人吃惊的科学活动之一。它不仅第一时间登上了各大新闻版面，还给克隆界注入了迄今为止最为强劲的强心剂。多莉的诞生可以证明是高等动物克隆出的可能性，并能够正常生存繁殖。之后，各种高等动物被成功克隆。 克隆牛和鼠在1997年出生，与人类相似的猴子在1999年利用胚胎成功被科学家克隆。克隆猪在2000年亮相并被克隆。兔子，蝎子，鹿，马在2003年成功，克朗狗和果蝇于2005年出生，克隆骆驼于2009年在迪拜出生。 这些年，由于科学的发展，克隆的应用更加普及，开始商业化。2009年灭种的庇里牛斯山羊被成功克隆了。是人类首次灭种的物种被克隆出来的时候。虽然只活了7分钟，但是给再生灭绝的动物，带来了希望。 3.我国克隆猴诞生及克隆难点 2018年1月25日，《细胞》杂志以封面文章形式在线宣布:人类已经实现对非人灵长类的克隆。中国科学院神经科学研究所的孙强研究小组成功栽培了从体细胞克隆出的2个食蟹猴。它们有2个意味深长的名字“中中”和“华华”，其中既体现出这一科研成果具有里程碑式的重要意义，也从一个侧面展示了中国科学家对原始创新与科研领跑的巨大渴望。 体细胞克隆猴难点主要在3个方面。 首先，卵子的成熟度和胚胎产生条件不同，有必要探究很多实验条件。猴子是拥有有限资源的灵长类动物。母猴需要4 ~ 5年的性成熟才能超排取卵。在测试中，如果要超量就需要多数的母猴，为了代孕，必须要有大量的母猴。 其次是熟练的核移植技术人员、外科排卵和胚胎移植技术人员的必要性。被这一克隆的猴子核移植技术人员为迅速的脱核技术(图3)，使用了纺锤的偏振光发射核物质。细胞从核物质中除去是不可缺少的。但是，在“克隆猪”试验中使用的盲吸法的除核的速度仅为40%}80%，紫外线(uv)跟踪器除核法对胚胎的产生造成了一定程度的伤害。所以，为了确认这个测试的成功，使用纺锤体偏振光示踪去核对试验是很重要的。 三是猴的体细胞克隆胚胎发育差。猴子的胚胎发育是内在的问题，在捐赠者细胞的基因组中存在程序性耐性区(rrr)。rrr的存在阻碍基因表达，阻碍了进行多分化能力的调节，是灵长类动物克隆无法成功的最大障碍，使得scnt技术上的胚胎发育受到影响，这个问题已经成为灵长类动物克隆的最大问题。研究人员发现，改善scnt胚胎的胚盘细胞产生的h3三甲基化赖氨酸9(H3IK9me3)的去甲基化酶Kdm4和组蛋白乙酞化酶抑制剂曲古抑菌素A(tsa)的卵细胞的实施以及妊娠率。在使用猴子纤维细胞的scnt实验中，在代孕母猴21个例子中，有6例成功怀孕，最终产生了2只健康的猴子“中中”和“华华”。 4.克隆猴的发展现状 谈到克隆猴，最早可以追溯到1997年，美国俄勒冈灵长类动物研究中心孟励博士作为第1作者报道了通过胚胎卵裂球核移植技术获得的第1只克隆猴。2002年，俄勒冈灵长类研究中心研究人员利用猴的体细胞进行核移植试验，但是没有进行胚胎移植。2003年，美国匹兹堡大学研究人员进行了克隆猴胚胎的移植，但没有检测到