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呋喃唑酮诱导大鼠扩张型心肌病模型的建立 扩张性心肌病（tcm）是以心肌细胞坏死、间质纤维和胶原增生为主要病理特征的。以心腔扩大、心律失常、充血性心力衰竭和猝死为主要临床表现的一种严重心脏病。该病近年发病有增多趋势,且以青壮年男性重体力劳动者居多,目前除心脏移植外尚无有效治疗手段。虽然近十年来人们试用过背阔肌包裹术、减容术、起搏术等方法,但临床效果均难以令人满意。骨骼肌卫星细胞移植、骨髓间质干细胞定向心肌细胞分化亦仅限于动物试验。因此,DCM患者的预后极差。我们借鉴呋喃唑酮诱导的火鸡扩张型心肌病动物模型,制作呋喃唑酮诱发SD大鼠扩张型心肌病动物模型,旨在建立一个可靠的、在病理、脂肪酸及神经体液因子变化方面更接近于人类DCM的动物模型,为该病的研究提供实验基础。 1 材料和方法 1.1 血清因子及心功能指标检测 DCM SD大鼠模型采用出生两周、母乳喂养的雌性SD大鼠,15只喂饲呋喃唑酮组;剂量按0.2mg/g体重,每周按体重调整一次用药剂量,共十周;另取12只正常对照组为单纯母乳喂养及正常饲料作为对照。 观察内容包括:心电图检测:记录Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、aVR、aVL、aVF六个导联ECG。超声心动图检测:采用Siemens超声仪,探头频率为7.5MHz,胸骨旁左心室长袖测定左室收缩末期内径(LVESD)和左室舒张末期内径(LVEDD),左心室射血分数(LVEF)以(LVEDD-LVESD)/LVEDD×100%计算。血液检测:各组SD大鼠以乙醚吸入麻醉生效后,从球后静脉取血3ml以上,分别处理后用于测定ANP、ET、AngⅡ、TXB2、PGF1α及T4。病理检查:喂药后四周或十周处死,剪取心脏中段2～3mm厚,经10%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋、切片、HE及MASS染色,光镜下放大100倍观察及戊二醛固定电镜观察。脂肪酸测定:剩余心肌尽量剪除心底血管部分,脂类以改良后的Folch方法提取。由中国科学院大连化学物理研究所色谱分析室提供氢火焰离子化鉴定器,30米毛细硅管柱,气相色谱仪(上海分析仪器厂1102)检测三氟化硼甲酯后的脂肪酸。 1.2 体重、体重及正常大鼠的饲料 试验分三组:(1)13只喂饲呋喃唑酮组,剂量按0.2mg/g体重,共四周;(2)15只除喂饲呋喃唑酮外加喂葵花籽;(3)另有9只为单纯母乳喂养及正常鼠饲料的正常对照组。三组心脏超声、脂肪酸观察内容同上。 1.3 统计方法 计量资料用Excel统计软件,用t检验对数据进行分析,实验组与正常对照组间P0.05为有显著差异。 2 结果 2.1 神经土地因子 见表1。(1)体重及心脏重量,实验结束时实验组较对照组明显减小,P0.01;但心脏重量/体重(HW/BW)增大,P0.01。(2)心电图的心率与P-R间期两组间无差异;QRS时限实验组较对照组明显延长,P0.001。(3)心脏超声,收缩末期内径(LVESD)实验组明显增大,P0.001;舒张末期内径(LVEDD)两组无显著性差异,但以LVEDD/BW计算,则显著增大,P0.01;左室射血分数(LVEF),实验组明显减少,P0.001。(4)血浆神经体液因子指标,见表2(以下各种数据均为原测定值的自然对数):血浆AngⅡ,ET和ANP实验组较对照组有增高趋势,但无显著性差异;T4明显升高,P0.001;TXB2明显升高,P0.001;而PGF1a较对照组显著降低,P0.01;故血浆PGF1α/TXB2实验组对照组明显降低,P0.001。 病理检查:见正常对照组光镜下表现为心肌纤维排列均匀整齐,横纹清楚,细胞大小均一,仅有少量的胶原纤维。10周实验组光镜下表现:心肌纤维染色变淡,呈波纹状排列,横纹消失,变性的心肌纤维呈波浪状排列,其间可见残存的、粗大的、浓染的心肌细胞,细胞核淡染,或看不清楚,并可见大量蓝染、增生的胶原纤维。电镜见正常对照组线粒体大小一致,线粒体嵴排列规则,大小一致,滑面内质网排列规则,核膜均匀,染色质分布均匀,肌丝排列整齐,横纹清楚。10周实验组:线粒体大量增生、肿胀、嵴排列不规则,细胞核内染色质分布不均匀,呈团块状,细胞核形状不规则,滑面内质网分布不均匀,粗面内质网有脱颗粒现象,肌丝排列疏松,不规则。 2.2 两组心肌脂肪酸含量的比较 见表3。(1)实验组较对照组体重明显减少,HW/BW增大;而呋喃唑酮加葵花籽组居中。(2)ECG:两组无差异。(3)超声指标:与第一部分相同,而呋喃唑酮+葵花籽组在上述各项指标中均居中,即较对照组差而较呋喃唑酮组好,且与对照组和呋喃唑酮组之间均有显著性差异。(4)心肌中脂肪酸的测定见表4,其中呋喃唑酮组亚油酸(18∶2n-6)较对照组明显减少,P0.001;而呋喃唑酮+葵花籽组亚油酸含量居于正常组和呋喃唑酮组之间,与正常对照组和呋喃唑酮组均有差异,P0.05。(5)病理改变