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家鸡CRH在不同组织及发育阶段下丘脑中的表达分析 　　摘要：促肾上腺皮质激素释放激素（Corticotropin releasing hormone，CRH）是一种主要由下丘脑合成和分泌的神经肽，通过与CRH受体的特异性结合在多种生理过程中发挥重要作用。尽管已经在哺乳动物中对该肽进行了广泛而深入的研究，但是在包括鸟类的非哺乳类动物中，其功能和作用机制的研究却十分缺乏。作为一种重要的经济动物，家鸡在世界各地广泛养殖，因此将其作为本课题的研究对象。通过定量实时PCR来探究家鸡CRH在不同组织中的空间表达谱和下丘脑组织中的时间表达谱。结果发现CRH主要在家鸡脑组织中表达，在下丘脑表达量最高，在中脑、端脑和后脑中也发现了其表达信号。在家鸡下丘脑组织中，CRH的表达水平随着发育进行持续升高，在第31周达到最高表达水平。我们的数据不仅揭示了家鸡CRH的表达谱，还为进一步研究CRH在鸟类（包括家鸡）中的功能奠定了基础。 关键词：家鸡；促肾上腺皮质激素释放激素；组织表达；下丘脑 前言 　　促肾上腺皮质激素释放激素（Corticotropin releasing hormone，CRH）是一种主要由下丘脑合成和分泌的含 41个氨基酸残基的神经肽，是由Vale等人在1981年从羊下丘脑中分离[1]。一般而言，当动物遭受外界或内源性刺激后，下丘脑产生CRH刺激垂体促肾上腺皮质激素（Adrenocorticotropic hormone，ACTH）的分泌，以此来应答应激反应并维持内环境的稳态[2]。 　　CRH与其结构和功能相关的神经肽组成了CRH家族，包括尿皮素1（Urocortin-1，UCN1）、尿皮素2（Urocortin-2，UCN2）、尿皮素3（Urocortin-3，UCN3）、蛙皮降压肽（Sauvagine）和鱼尾加压素（UrotensinⅠ，UTS1）等[3]。该家族及其相关肽也是“下丘脑—垂体—肾上腺”（Hypothalamus-pituitary-adrenal，HPA）轴的十分关键的组成部分，在多种生理过程中都担当着重要角色。在应激状态下，CRH激活HPA轴，作用于垂体前叶促皮质激素细胞的CRHR促进ACTH 的合成与释放，进而合成与释放糖皮质激素[4]。中枢神经系统是CRH家族肽的主要分布部位，例如在大脑皮层、下丘脑旁室核、海马、杏仁核、黑质、蓝斑核、脊髓、终纹床核、垂体等部位大量分布。CRH家族肽参与了包括学习、记忆、焦虑、神经保护、应激反应、提升血糖水平、食物摄取抑制和刺激交感神经系统活动在内的多种相关反应[1,5-8]。此外，CRH家族在外周器官中也有存在，比如小肠、胃、胰腺和生殖系统中，主要负责调节各器官的功能[9]。CRH及其家族相关肽对生物体的健康或稳态的维持是不可缺少的成分。它对各种压力刺激的适应性反应调节异常可能会严重影响机体的正常生理功能，使动物遭受各种疾病的困扰，包括抑郁症和焦虑症 [10,11]。　　CRH通过与其特异性受体的胞外配体结合域结合，激活细胞内下游多种信号级联反应，如cAMP/PKA，进而发挥相关生物学功能[12]。目前已有两种类型的CRH受体（CRHR1和CRHR2）被鉴定确认，这两种类型的受体都属于G蛋白偶联受体家族（G-protein-coupled receptors，GPCRs），相互间具有68%的序列同源性，含有7个跨膜结构域[13,14]。CRHR1大量表达分布在中枢神经系统的脑干、大脑边缘、新皮质等区域，CRHR2则限制性地表达在侧间核、中缝核、内侧离散脑区、皮质、腹内侧下丘脑核及下丘脑旁室核[15]等区域。由于CRHR1和CRHR2在结构上的差异以及在中枢神经系统中不同的分布模式使其介导了CRH不同的生理功能。在应激调控过程中，CRH能由CRHR1介导的快反应途径进行调节，也能由CRHR2介导的慢反应途径发挥作用[16]。 　　CRH家族肽及其受体在哺乳动物中，例如在人类、大鼠、小鼠等多个哺乳动物中对CRH家族肽及其受体进行了较为完善的研究，并且已经取得了一系列的研究成果[17]。但是在除哺乳动物以外的脊椎动物中，还研究甚少。探究CRH在非哺乳类脊椎动物中的功能和作用机制变得尤为重要。因此，本研究拟以鸟类模式动物——家鸡为研究对象，采用实时荧光定量 PCR（Real-time quantitative PCR，qRT-PCR）检测了CRH在不同组织及不同发育阶段下丘脑的表达情况。我们的研究为解析鸟类CRH的结构、功能和作用机制提供新的数据，还能为探究CRH在脊椎动物中的功能进化奠定基础。 材料与方法 材料与试剂 实验材料 种蛋和家鸡（Lohmann品系）采购于成都牧星禽业。 实验试剂 　　RNAzol（购自Molecular Research Central）、反转录试剂