团体标准草案-轮状病毒.docxVIP

T/CCAA 36-2020X Ⅱ ICS03.120.20 CCS A 00 团体标准 T/CCAA XX—XXXX 水体中轮状病毒检测方法 实时荧光RT-PCR法 A method for determination of rotavirus in water real-time RT-PCR （征求意见稿） 202X -XX -XX发布 202X - XX - XX实施 中国认证认可协会 发布 T/CCAA 36-2020X 目 次 TOC \o 1-2 \h \u 目 次 II 前 言 II 1 范围 3 2 规范性引用文件 3 3 术语和定义 3 4 设备和材料要求 4 5 试剂 4 6 操作步骤 5 6.1 病毒提取 5 6.1.1 膜过滤法 5 6.1.2 水体自动采样及微生物富集系统法 5 6.2 病毒RNA提取和纯化 5 6.2.1 病毒裂解 6 6.2.2 病毒RNA提取 6 6.2.3 病毒RNA纯化 6 6.3 质量控制 6 6.3.1 空白对照 6 6.3.2 阴性对照 6 6.3.3 阳性对照 6 6.3.4 过程控制病毒 6 6.3.5 外加扩增控制 7 6.4 实时荧光RT-PCR 7 7 结果与报告 7 7.1 检验有效性判定 7 7.2 结果判定 7 7.3 结果报告 7 8 生物安全措施 8 附录 A 9 附录B 10 附录 C 11 附录 D 13 附录E 1 附录F 3 T/CCAA XX-202X T/CCAA XX-202X Ⅲ PAGE PAGE III 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国认证认可协会提出并归口。 本文件起草单位：上海市徐汇区疾病预防控制中心、中华人民共和国丹东海关、拱北海关技术中心、广州海关技术中心、庄河市检验检测认证技术服务中心、北京美正生物科技有限公司、上海安合环境检测技术有限公司、国检测试控股集团辽宁有限公司。 本文件主要起草人：刘志勇、麻丽丹、姚丽锋、周傲白雪、丁宁、朱金艳、刘磊、陶文靖、陆嘉诚、盛琳、杨军、杨希国、李丽、刘石鑫。 水体中轮状病毒检测方法 实时荧光RT-PCR法 范围 本文件给出了水体中轮状病毒检测方法 实时荧光RT-PCR法检测要求。 本文件适用于水体中轮状病毒检测，包括水源水、包装饮用水、食品加工用水、水产养殖用水、海水、娱乐用水、医疗机构污水和地下水的定性检测。 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 术语和定义 GB/T 27000界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 轮状病毒 Hepatitis A virus（HAV） 轮状病毒为双链RNA病毒，属呼肠孤病毒科轮状病毒属。病毒呈圆球形，有双层衣壳，每层衣壳呈二十面体对称。电子显微镜下观察，成熟的轮状病毒为带有短纤突且外缘光滑近似车轮状的颗粒，内衣壳的壳微粒沿着病毒体边缘呈放射状排列，形同车轮辐条，故得此名。完整病毒大小约70 nm～75 nm，无外衣壳的粗糙型颗粒为50 nm～60 nm。具双层衣壳的病毒体有传染性，病毒的核心为双股RNA，由11个不连续的节段组成。轮状病毒粒子由三层蛋白衣壳组成：即外层衣壳（VP7和VP4）、中间层衣壳（VP6）和内层衣壳（VP2），通常只有包裹三层蛋白衣壳的粒子才具有传染性。病毒基因组被内层衣壳、RNA依赖性RNA聚合酶（VP1）及修饰酶（VP3）包裹，并由11个不连续的dsRNA组成，编码6个结构蛋白（VP1～VP4/VP6/VP7）和6个非结构蛋白（NSP1～NSP6），除第11个节段含有两个开放阅读框并编码NSP5和NSP6外，其他每节段分别编码一种蛋白。在宿主体内，不同株轮状病毒的同时感染可能会造成11个基因节段发生重配，产生新型的轮状病毒。轮状病毒编码的位于中间衣壳的VP6蛋白具有高度保守性，常称之为群抗原或诊断抗原，根据其抗原性的不同可以将轮状病毒分为A～G 共七个种群，感染人的轮状病毒大多属于A群。 3.2