细胞培养工程绪论详解演示文稿.pptVIP

* 人胰岛素 第二代胰岛素 20 世纪 80 年代，通过基因工程（重组 DNA 技术）将人胰岛素基因转染至细胞表达高纯度的合成人胰岛素； 酵母：微生物发酵过程 中国仓鼠卵巢（CHO）细胞：动物细胞培养 免疫反应低，较少诱发免疫反应（包括过敏反应），注射剂量比动物胰岛素平均减少 30%，皮下脂肪萎缩的现象也随之减少； 人胰岛素的稳定性高于动物胰岛素； 主要问题：在起效时间、峰值时间、作用持续时间上仍不能模拟生理性胰岛素分泌模式，使用也不方便 本文档共67页；当前第31页；编辑于星期日\22点21分 * 人胰岛素类似物 第三代胰岛素 20 世纪 90 年代末，基于对人胰岛素结构与功能的深入了解，研制更适合人体生理需要、更方便使用的胰岛素类似物 利用基因工程技术改变胰岛素肽链上某些位点的氨基酸组合（蛋白质工程），改变等电点，增加六聚体强度； 以钴离子替代锌离子； 在分子中增加脂肪酸链，加大与白蛋白的结合； 口服剂型（肠道生物利用率过低） 本文档共67页；当前第32页；编辑于星期日\22点21分 * 人血清白蛋白（HSA） 理化性质： 单链多肽（585 AA） 分子量 66kD 血浆唯一非糖基化蛋白质 浓度范围 35-50 g/L 含量约占血浆总蛋白的 60% 生理特性： 在肝脏合成，半衰期约为 20 天； 维持血液正常的渗透压； 运输脂肪酸、胆色素、氨基酸、类固醇激素、金属离子和非水溶性药物分子等 本文档共67页；当前第33页；编辑于星期日\22点21分 * 人血清白蛋白（HSA） 在临床上，人血清白蛋白可用于治疗休克与烧伤，用于补充因手术、意外事故或大出血所致的血液丢失，也可以作为血浆增容剂； 适应症：用于失血性休克、脑水肿、流产引起的白蛋白缺乏、肾病等； 用量用法：静注或静滴：用量视病情而定； 规格：注射液，每支（瓶）25% 20 ml。 本文档共67页；当前第34页；编辑于星期日\22点21分 * 天然人血清白蛋白的提取纯化工艺 British Journal of Anaesthesia 85(6): 887-95 (2000) 现代纯化技术 本文档共67页；当前第35页；编辑于星期日\22点21分 * 人血清白蛋白（HSA） 从人血清提取白蛋白的主要问题 生物污染风险：传染病原体如 HIC、HBV、HCV 等 高原料成本：人血浆原料昂贵，来源有限 杂质：杂质种类多，含量高 生产成本：纯化成本一般占生产成本的 50% 以上 本文档共67页；当前第36页；编辑于星期日\22点21分 * 人血清白蛋白（HSA） 基因工程酵母大规模发酵：酵母属于微生物，易培养，繁殖快，遗传背景比较清楚，便于基因工程操作 构建 HSA 基因表达载体； 转染酵母细胞； 酵母细胞将 HSA 基因转录、翻译成多肽链； 酵母细胞具有真核细胞的蛋白质翻译后加工能力，包括多肽链正确折叠（蛋白质活性）的胞内环境和糖基化修饰系统（对某些蛋白质活性至关重要），但 HSA 无需糖基化； 酵母细胞具有蛋白质产物分泌机制，无需破碎细胞，产物浓度高，杂质含量低，利于降低纯化难度和成本； 酵母大规模发酵属于成熟工业技术； 生物污染风险极低。 本文档共67页；当前第37页；编辑于星期日\22点21分 * 生化制药的局限性 原料来源有限，尤其是种属特异性高的药用蛋白（如 hGH） 即使是异种属蛋白质药物（如猪胰岛素），目标蛋白质在原料中的含量相对极低，而且杂质种类多、总含量高，不利于目标蛋白质的纯化，回收率低，因此生产效率低下，成本高，不利于商业化生产并满足市场需求（纯化成本一般占生产成本 50% 以上，牢记） 原料来源：依原料性质而论 安全风险：原料生物污染 疯牛病 / 病毒污染 / 其它微生物污染 猪很可能是人-禽类病毒传染的媒介 避免动物来源原料是生物制药行业的总体趋势 本文档共67页；当前第38页；编辑于星期日\22点21分 * 生物技术制药的优越性 开发安全、高效、低成本生产工艺，始终是促进生物制药行业发展的主要推动力 原料：来源稳定，不受季节影响，成分明确，非动物 工艺：过程重复性好，生产稳定，过程可放大以满足大规 模商业化生产 产率：目标蛋白质浓度高，益于纯化，高收率 杂质：宿主细胞蛋白 药物安全性： 免疫原性：非人源糖型有可能诱导免疫反应 宿主内源性病毒明确（如啮齿类逆转录病毒颗粒），纯化工艺将其控制在安全范围之内 宿主细胞蛋白质、DNA 控制在安全范围 从生产原料上阻断生物污染（如病毒） 本文档共67页；当前第39页；编辑于星期日\22点21分 * 在蛋白质药物商业化生产中，借助于基因工程技术，细胞培养技术与微生物发酵技术大规模表达生产重组蛋白质药物，不但无限拓宽了蛋白质药物品种，也能在质量控制体系（GMP）的框架之内高